[发明专利]一套用于获取馆藏甲虫标本DNA条形码的Mini-Barcoding引物及其应用

权利要求书

1.一套用于获取馆藏甲虫标本DNA条形码序列的Mini-Barcoding引物组，其特征在于，所述引物组为巢氏PCR引物组，由引物对Cocc658、Cocc301和Cocc413组成；其中，引物对Cocc658为第一轮巢氏PCR引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO.9～10所示；引物对Cocc301和Cocc413为第二轮巢氏PCR引物，引物对Cocc301的核苷酸序列分别如SEQ IDNO.1～2所示，引物对Cocc413的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.7～8所示。

2.权利要求1所述的Mini-Barcoding引物组在甲虫鉴定、分类中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，是在馆藏甲虫标本鉴定中的应用。

4.一套获取馆藏甲虫标本DNA条形码序列的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测甲虫标本的基因组DNA；

S2.以步骤S1所述基因组DNA为模板，用权利要求1中所述的巢氏PCR引物组进行巢式PCR扩增反应；其中，第一轮扩增使用引物对Cocc658，然后将PCR产物稀释10倍作为第二轮PCR的模板，分别用引物对Cocc301和Cocc413扩增得到甲虫标本两段目的基因片段，然后拼接得到完整的馆藏甲虫标本DNA条形码序列。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述巢式PCR的反应体系均为25 µL体系：无菌水10 µL，PCR Super Mix 12 µL，10 µmol/L上下游引物各1 µL，DNA模板1 µL。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述巢式PCR的反应程序均为94℃预变性3min；94℃变性30 s，50℃退火30 s，72℃延伸1 min，35个循环；72℃最终延伸5 min。

7.权利要求1所述的Mini-Barcoding引物组在制备馆藏甲虫标本鉴定产品中的应用。

8.一套用于鉴定馆藏甲虫标本的产品，其特征在于，包含权利要求1所述的Mini-Barcoding引物组。

9.根据权利要求8所述的产品，其特征在于，还包含用于巢式PCR的反应试剂。