[发明专利]一种茶树热激蛋白CssHSP-6基因的重组载体和表达方法在审
| 申请号： | 201910357329.6 | 申请日： | 2019-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN110117604A | 公开（公告）日： | 2019-08-13 |
| 发明（设计）人： | 谢鑫;李向阳;蒋君梅;任明见 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/70;C12P21/02;C07K14/415 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 茶树热激蛋白 基因 重组载体 抗病性 原核表达载体 可溶性蛋白 生物学特性 蛋白表达 蛋白晶体 茶树 构建 优化 研究 | ||
1.一种茶树热激蛋白CssHSP-6基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体的制备方法如下：提取茶树叶片的RNA，并反转录出cDNA；以cDNA为模板扩增CssHSP-6基因；将CssHSP-6扩增产物经EcoRI和XhoI双酶切后，通过DNA连接酶插入到经同样双酶切的pET-28a表达载体中，得到重组质粒pET-28a-CssHSP-6。
2.根据权利要求1所述的重组载体，其特征在于，以cDNA为模板，利用以下引物扩增CssHSP-6基因，引物序列如下：
上游引物：CssHSP-6-F：GC
下游引物：CssHSP-6-R：CG
上下游引物分别如SEQ ID NO.3、4所示。
3.一种表达茶树热激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用权利要求1或2所述的重组载体转化大肠杆菌细胞，得到表达CssHSP-6的重组原核表达菌株；
(2)将重组原核表达菌株接种到卡那霉素液体培养基或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，过夜培养活化菌株；
(3)将活化的重组原核表达菌株转接到卡那霉素液体培养基或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，震荡培养后加入IPTG诱导重组CssHSP-6的表达；
(4)诱导完成后，回收并纯化所表达的CssHSP-6重组蛋白。
4.根据权利要求3所述的表达茶树热激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，步骤(3)中在震荡培养至OD600＝0.5时，加入终浓度为0.8mM的IPTG，在37℃诱导培养。
5.根据权利要求3所述的表达茶树热激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL。
6.根据权利要求3所述的表达茶树热激蛋白CssHSP-6基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素+氯霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL，氯霉素为50ug/mL。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于贵州大学，未经贵州大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201910357329.6/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
