[发明专利]一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法

权利要求书

1.一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、样本准备：番茄澳粉208自交系为实验样本；

S2、试剂准备：

脱落酸(ABA)：a,0μM浓度的ABA；b,10μM浓度的ABA；c,100μM浓度的ABA；d,1000μM浓度的ABA；

甲二氢愈创木酸(NDGA)：e,0μM浓度的NDGA；f,10μM浓度的NDGA；g,100μM浓度的NDGA；h,1000μM浓度的NDGA；将以上试剂分别放入备用器皿中，方便后续使用；

S3、试剂使用后对正常花粉的百分率检测

(1)选取小孢子时期的花蕾，使用注射器取药液用针头轻轻掰开萼片，将药液注入花药处；

(2)将花蕾立即放入FAA固定液，真空抽气20-30Min，固定24h后进行石蜡切片制作；

(3)经FAA固定液固定的样品，经叔丁醇梯度脱水之后，包埋在石蜡中，在轮转切片机上进行切片，然后将切片放在干净的载玻片上，加去离子水浮片，之后放在烘箱中进行烘片；

(4)样品烘片后，在二甲苯中去蜡，然后经梯度乙醇复水后，在海氏苏木精染液中染色；

(5)再经梯度乙醇脱水后，经1％固绿复染，经二甲苯透明之后用加拿大树胶封片观察，使用显微镜来统计正常花粉的百分率。

2.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于：所述步骤S3中步骤1处取多组样品，分别在处理之后的第2天、4天、6天及8天取样。

3.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于：所述轮转切片机对样品进行切片，切片厚度为8-10μM。

4.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于：所述观察和统计花粉百分率时，在OLYMPUS BX41光学显微镜下观察，并用OLYMPUS C-7070 Wide ZooM拍照，照片用Adobe Photoshop CS5软件进行处理编辑。

5.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于：所述样品烘干的温度为43℃，同时需要进行24h的烘干过程。

6.根据权利要求1所述的一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，其特征在于：所述步骤S3中步骤5统计正常花粉百分率时，经苏木精和固绿染色后，在显微镜下观察花粉，会很清楚的观察到有的花粉空瘪、透明、畸形为异常的花粉，有的花粉饱满、规则、不透光为正常花粉，以此统计正常花粉的百分率可初步判断花粉的质量，正常花粉的百分率越高的花粉其质量相对越高。