[发明专利]一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法

说明书

本发明公开了一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，涉及农业技术领域，其包括以下步骤：S1、样本准备：番茄澳粉208自交系为实验样本；S2、试剂准备：脱落酸(ABA)：a,0μM浓度的ABA；b,10μM浓度的ABA；c,100μM浓度的ABA；d,1000μM浓度的ABA；甲二氢愈创木酸(NDGA)：e,0μM浓度的NDGA；f,10μM浓度的NDGA；g,100μM浓度的NDGA；h,1000μM浓度的NDGA。本文分别以不同浓度的ABA及NDGA溶液处理番茄花药，以探索引起花粉败育的有效药剂浓度，研究结果将为进一步阐明ABA调控植物雄蕊发育的分子机制、揭示雄性不育的调控机理同时也为ABA相关的雄性不育在育种工作中的应用提供一定的理论基础。

技术领域

本发明涉及农业技术领域，具体为一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法。

背景技术

花粉的成熟对植物的繁衍，尤其对农作物的产量和品质都有决定性的影响。花粉的成熟受极其复杂的激素网络调控，其中脱落酸对花粉成熟的调控机理尚不清楚。

番茄为雌雄同花植物，通常由雌雄性配子的结合进行繁殖。雄蕊的正常发育对于番茄繁衍、种质资源存续，尤其产量有决定性影响。然而，雄性不育的发现、研究和利用有效推动了多种农作物杂交种的应用和推广，雄性不育在作物育种中具有重要发展潜力和应用价值。番茄雄性不育分为花粉败育型、雄蕊退化型及功能不育型，目前番茄雄性不育基因虽然已定位到各条染色体，但尚需进一步精细定位，影响番茄雄性不育的因素繁多，如激素、环境、物质代谢和能量代谢等，目前，番茄雄性不育的调控研究主要为生理生化水平方面，其分子机制研究不多，特别是脱落酸对雄性不育影响的分子机理尚不清楚。

为探究脱落酸在花粉成熟过程中的作用，更好的了解其对农作物产量和品质的影响，本发明提供一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，解决了现在尚不清楚脱落酸对花粉成熟的调控机理，不能精确通过脱落酸控制农产品的品质和产量的问题。

(二)技术方案

为达到以上目的，本发明采取的技术方案是：一种外源ABA处理对番茄花粉成熟的细胞学影响的探究方法，包括以下步骤：

S1、样本准备：番茄澳粉208自交系为实验样本；

S2、试剂准备：

脱落酸(ABA)：a,0μM浓度的ABA；b,10μM浓度的ABA；c,100μM浓度的ABA；d,1000μM浓度的ABA；

甲二氢愈创木酸(NDGA)：e,0μM浓度的NDGA；f,10μM浓度的NDGA；g,100μM浓度的NDGA；h,1000μM浓度的NDGA；将以上试剂分别放入备用器皿中，方便后续使用；

S3、试剂使用后对正常花粉的百分率检测

(1)选取小孢子时期的花蕾，使用注射器取药液用针头轻轻掰开萼片，将药液注入花药处；

(2)将花蕾立即放入FAA固定液，真空抽气20-30Min，固定24h后进行石蜡切片制作；

(3)经FAA固定液固定的样品，经叔丁醇梯度脱水之后，包埋在石蜡中，在轮转切片机上进行切片，然后将切片放在干净的载玻片上，加去离子水浮片，之后放在烘箱中进行烘片；

(4)样品烘片后，在二甲苯中去蜡，然后经梯度乙醇复水后，在海氏苏木精染液中染色；

(5)再经梯度乙醇脱水后，经1％固绿复染，经二甲苯透明之后用加拿大树胶封片观察，使用显微镜来统计正常花粉的百分率。