[发明专利]一种玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的重组载体和表达方法在审
| 申请号： | 201910358656.3 | 申请日： | 2019-04-30 |
| 公开（公告）号： | CN110423770A | 公开（公告）日： | 2019-11-08 |
| 发明（设计）人： | 谢鑫;李向阳;蒋君梅;王勇;任明见;孙涛 | 申请（专利权）人： | 贵州大学 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N15/66;C07K14/37 |
| 代理公司： | 贵阳中新专利商标事务所 52100 | 代理人： | 张行超 |
| 地址： | 550025 贵州省贵*** | 国省代码： | 贵州;52 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 黑粉 效应蛋白 玉米 基因 重组载体 原核表达载体 可溶性蛋白 生物学特性 蛋白表达 蛋白晶体 构建 农药 防治 优化 研究 | ||
1.一种玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的重组载体，其特征在于，所述重组载体的制备方法如下：提取玉米RNA，并反转录出cDNA；以cDNA为模板扩增CMU1基因；将CMU1扩增产物经EcoRI和XhoI双酶切后，通过DNA连接酶插入到经同样双酶切的pET-28a表达载体中，得到重组质粒pET-28a-CMU1。
2.根据权利要求2所述的重组载体，其特征在于，以cDNA为模板，利用以下引物扩增CMU1基因，引物序列如下：
上游引物：CMU1-F：GC
下游引物：CMU1-R：CG
上下游引物分别如SEQ ID NO.3、4所示。
3.一种表达玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)用权利要求1或2所述的重组载体转化大肠杆菌细胞，得到表达CMU1的重组原核表达菌株；
(2)将重组原核表达菌株接种到卡那霉素液体培养基或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，过夜培养活化菌株；
(3)将活化的重组原核表达菌株再转接到卡那霉素液体培养基或卡那霉素+氯霉素液体培养基中，震荡培养后加入IPTG诱导重组CMU1的表达；
(4)诱导完成后，回收并纯化所表达的CMU1重组蛋白。
4.根据权利要求3所述的表达玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的方法，其特征在于，步骤(3)中在震荡培养至OD600＝0.5时，加入终浓度为1.0mM的IPTG，在25℃诱导培养。
5.根据权利要求3所述的表达玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL。
6.根据权利要求3所述的表达玉米黑粉菌效应蛋白CMU1基因的方法，其特征在于，所述卡那霉素+氯霉素液体培养基中卡那霉素为50ug/mL，氯霉素为50ug/mL。
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