[发明专利]一种基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法及探针

权利要求书

1.一种基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，该方法用于非诊断目的的检测，该方法的检测体系中含有：crRNA、Cas13a、探针；所述的crRNA包含针对目的基因的靶点设计的向导序列；所述的Cas13a通过所述的crRNA识别目的基因上的靶点后，能够激活Cas13a的RNA酶活性，并对所述的探针进行切割，从而获得检测信号；该方法的特征在于：

所述的探针包含1段RNA序列，该RNA序列的两端分别连接1段DNA序列；所述探针上的核苷酸均进行硫代磷酸骨架的修饰，以在相邻核苷酸之间形成硫代磷酸酯键；所述RNA序列上的若干个核苷酸还进行了二甲氧基修饰，并且，所述的RNA序列上至少含有两个连续的未进行二甲氧基修饰的核苷酸。

2.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的DNA序列含有6个脱氧核糖核苷酸。

3.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的RNA序列含有为8-12个核糖核苷酸。

4.根据权利要求3所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的RNA序列中，进行了二甲氧基修饰的核苷酸的个数为4个。

5.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述探针的序列为：

ATCTTCGUCGCCCUGGCATACGTT；

该探针前端的6个核苷酸以及后端的6个核苷酸分别组成DNA序列，探针的第11至第14个核苷酸进行了二甲氧基修饰。

6.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的探针还包含：分别与探针两端的DNA序列连接，用于产生检测信号的第一修饰基团和第二修饰基团。

7.根据权利要求6所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的第一修饰基团和第二修饰基团分别为荧光报告基团和荧光猝灭基团。

8.根据权利要求6所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的第一修饰基团和第二修饰基团分别为5/6-羧基荧光素和Biotin。

9.根据权利要求1所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法，其特征在于，所述的目的基因为CYP2C19基因，针对CYP2C19基因的*2或*3位点设计向导序列；所述的向导序列与包含*2位点的针对性序列互补，或与包含*3位点的针对性序列互补；其中，

包含CYP2C19基因*2位点的针对性序列为：

TTTTCCCACTATCATTGATTATTTCCCG；

包含CYP2C19基因*3位点的针对性序列为：

AAACATCAGGATTGTAGCACCCCCTGG。

10.权利要求1-9任一项所述的基于CRISPR-Cas13a的特异性核酸片段的检测方法中采用的探针。