[发明专利]一种用于水样中多种抗生素的检测方法

权利要求书

1.一种用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：

101、水样的前处理：使用微孔滤膜对水样进行过滤，取过滤后水样，向过滤后水样中加入Na₂EDTA并使其溶解，再用稀酸调节pH值至2.5-3.5，得到前处理水样；

102、水样中抗生素的富集：将前处理的水样经自动固相萃取仪进行萃取，并选用经活化的HLB小柱进行痕量抗生素富集，后以甲醇洗脱，收集洗脱液，氮吹至干后复溶，滤过，作为待测液；

103、水样的检测：采用高效液相色谱串联质谱法，流动相梯度洗脱，待测液进样分析。

2.根据权利要求1所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述的抗生素为头孢拉定、头孢克肟、头孢丙烯、头孢羟氨苄、头孢孟多酯、磺胺甲恶唑、磺胺二甲嘧啶、甲硝唑、替硝唑、氟康唑、酮康唑、克霉唑、诺氟沙星、环丙沙星、依诺沙星、氟罗沙星、舒巴坦及氯霉素的任意一种。

3.根据权利要求1所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述101步骤中，取过滤后水样和Na₂EDTA的用量为：1000ml水样加入0.5gNa₂EDTA，并超声振荡使Na₂EDTA溶解。

4.根据权利要求3所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于水样的前处理中，所述的微孔滤膜材质为聚醚砜，内径为25mm，孔径为0.22μm或0.45μm；pH调节终点可接受范围为3.0±0.1。

5.根据权利要求1所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述102步骤中，水样中抗生素的富集中，HLB小柱规格为6cc/200mg或6cc/500mg，依次用10ml甲醇、5ml超纯水和5ml0.1％甲酸水溶液进行活化，以5～8ml/min的速度上样，并以10～16ml超纯水淋洗，最后用10ml甲醇以1ml/min速度洗脱；且洗脱后的液体在30～40℃水浴条件下氮气吹干，再加1ml乙腈-水(10:90，含0.1％甲酸)溶解，并过0.22μm尼龙材质的微孔滤膜。

6.根据权利要求5所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述HLB小柱以6ml/min的速度上样，并以12ml超纯水淋洗，最后用10ml甲醇以1ml/min速度洗脱；洗脱液在35℃水浴条件下氮气吹干；乙腈-水的用量比例为10:90，且乙腈-水中含0.1％甲酸。

7.根据权利要求5所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述103步骤水样检测中，所述的高效液相色谱串联质谱法液相色谱条件包括使用C₁₈色谱柱(100mm×2.0mm×3μm)，进样体积为10μl，柱温为35℃，流速为0.2ml/min，流动相为乙腈和0.1％甲酸水溶液，进行梯度洗脱。

8.根据权利要求7所述的所述的一种水样中18种抗生素的检测方法，其特征在于所述103步骤水样检测中，所述的高效液相色谱串联质谱法质谱参数包括：喷雾管雾化气(Gas1)、辅助加热气(Gas2)流速均为50psi、气帘气(Curtain Gas)为25psi、辅助加热温度为550℃、电离电压(IS)分别为+5500V(正离子)及-4500V(负离子)。

9.根据权利要求1所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述103步骤中，以抗生素目标物保留时间及特征离子对(m/z)进行定性，以峰面积按标准曲线法进行定量。

10.根据权利要求9所述的用于水样中多种抗生素的检测方法，其特征在于所述103步骤中，检出抗生素，用标准曲线法分别计算样品中各抗生素的质量浓度，计算方法为：

式中：

ρ_i——水样中抗生素组分的含量，ng/l；

m_i——标准曲线法计算水样中抗生素组分的质量浓度，ng/ml；

V——最终定容体积，ml；

V_s——水样取样体积，l。