[发明专利]一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法

权利要求书

1.一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于,包括以下步骤：

1) 母瓶的准备：对山药外植体进行剪切，并取带芽节段8～10株接种于固体培养瓶中培养40～45天，其间进行无菌性检测；所述固体培养瓶中具有pH值为5.8～6.2的固体培养基；

所述固体培养基配方：MS+BA 0.5～1.0mg/L + AD 5～10mg/L +IBA 0.3～0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂4.5g/L；

2) 将步骤1中固体培养瓶内制得的组培苗在无菌条件下切割成复数个小丛块；

3) 取复数个液体培养瓶，所述液体培养瓶中具有pH值为5.8～6.2的液体培养基；在每个液体培养瓶中接种10～12个所述小丛块进行浅层液体培养，培养周期为28～32天；

所述液体培养基配方：MS+BA 0.5～1.0mg/L + AD 5～10mg/L +IBA 0.3～0.5mg/L +蔗糖30g/L；

4) 将所述液体培养瓶内制得的组培苗再次在无菌条件下切割成复数个小丛块，并再次以每个液体培养瓶接种10～12个小丛块的数量均匀分配到复数个液体培养瓶中进行浅层液体培养，每个液体培养瓶内均具有所述液体培养基，培养周期为28～32天；

5) 反复进行步骤4以持续8～10轮的浅层液体培养，并且最后一轮浅层液体培养的培养周期为43～47天。

2.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：所述MS包括以下成分:硝酸铵1650mg/L、硝酸钾1900mg/L、氯化钙440mg/L、硫酸镁370mgL、磷酸二氢钾170mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、氯化钴0.025mg/L、硫酸铜0.025mg/L、硼酸6.2mg/L、钼酸钠0.25mg/L、碘化钾0.83mg/L、硫酸亚铁27.8mg/L、乙二胺四乙酸二钠37.2mg/L、烟酸0.5mg/L、维生素B₆ 0.5 mg/L、维生素B₁ 0.1mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2mg/L。

3.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：所述液体培养基的配方还包括PVP 100mg/L。

4.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：每个所述小丛块保留2～3株小苗。

5.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：所述固体培养瓶采用240ml的玻璃瓶。

6.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：所述液体培养瓶采用650ml的丝口玻璃瓶。

7.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：所述固体培养基在进行步骤1之前，所述液体培养基在进行步骤3、4、5之前，均需在121℃下灭菌20min，并在灭菌完后放入冷却室备用。

8.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：步骤3、4、5中，液体培养瓶所处的培养室温度为24±1℃，继代后前一个星期光照强度为5001x以下，光照周期12～16h或利用周围培养架的散射光；一个星期后光照强度调整为30001x。

9.如权利要求1所述一种规模化快速扩繁山药组培苗的生产方法，其特征在于：步骤3、4、5中，每轮浅层液体培养的过程中，每隔半个月震摇所述液体培养瓶一次。