[发明专利]一种适用于血液中苯丙胺类药物分析的QuEChERS前处理方法

说明书

本发明公开了一种适用于血液中苯丙胺类药物分析的QuEChERS前处理方法。该方法使用QuEChERS提取试剂对血液中的苯丙胺类药物进行有效提取，并用材料包对血液复杂基质进行净化，最后进行样本检测分析。该方法主要包括血液样本的采集、血液中苯丙胺及相关物质的提取、分离、净化。该发明的方法所要求的血液样本量最少可达到0.2 mL，最低检测限可达0.3~1.0 ng/ml，单个样本前处理在15分钟内便可完成。该方法对于血液样本中的毒药物分析方法的操作简单，所耗样本量少，有效消除血液中复杂的基质干扰，回收率大大增加，灵敏度显著提高，可广泛应用于法医毒物，法医临床检测。

技术领域

本发明属于QuEChERS前处理方法领域，具体涉及一种适用于血液中苯丙胺类药物分析的QuEChERS前处理方法。

背景技术

血液作为临床中最常规的生物检材，能够准确及时反映体内药物浓度以及各药物在靶器官的状况，而广泛应用于临床监控、法医毒物分析等多种领域中。在法医毒物分析中，多以受害人的血液检材为主，来监控获取当事人的实时血药浓度信息。

血液检材中含有大量的有机物，其中蛋白质(血红蛋白、血浆蛋白质及酶与蛋白类激素)、非蛋白含氮化合物(血液中除蛋白质以外的含氮物质，主要是尿素、尿酸、肌酸、肌酐、氨基酸、氨、肽、胆红素)、糖以及其他有机物和维生素、脂类(包括类固醇激素)等有机物在仪器分析中常常也会干扰到目标物的分析。前处理方法往往是消除基质效应的最常用方法，目前在毒物分析中常用的样品前处理技术有液液萃取、蛋白沉淀法、固相萃取法。液液萃取是根据物质在两种互不相溶的液体(如水相、有机相)中分配系数的不同，从而达到萃取、分离的目的。但是液液萃取须在合适的pH值条件下进行，以使待测物呈分子状态，因此需要调节不同的pH值，限制了其作为系统毒物分析的通用样品前处理方法。蛋白沉淀是通过加入不同类型的蛋白沉淀剂如极性大的有机溶剂(如甲醇、乙腈等)、酸性沉淀剂、无机盐、重金属盐等，从而达到沉淀蛋白的目的。它的优点是对于血浆样品的前处理没有选择性，只要足够量就可被测出。但是，蛋白沉淀的方法对于低浓度的样本经常检测不出，这对于系统毒物分析是个较大的不足，因为这样容易造成中毒样本的漏检。固相萃取(SPE)能够避免液液萃取中相分离不完全、难以自动化等缺点，但是固相步骤较多，处理较为繁琐，耗时较长。

SF/Z JD0107004-2016《司法鉴定技术规范--生物检材中苯丙胺类兴奋剂、哌替啶和氯胺酮的测定》所述，取血液样本2mL置于10mL具塞离心管中，加入10％氢氧化钠溶液0.2mL，用乙醚3mL提取，涡旋混合、离心，转移有机层至另一离心管，约60℃水浴中挥干，残留物中加入100uL乙腈：流动相缓冲液(70:30)进行溶解，取5uL进行LC-MS/MS分析。以上方法存在以下缺点：(1)操作条件严格：液液萃取须在合适的pH值条件下进行，以使待测物呈分子状态，在SF/Z JD0107004-2016中需要调节pH值。(2)操作不方便：使用乙醚液液萃取后会产生一定的乳化层，相分离不够完全，上清层的分离取液因操作者各异而会产生较大误差。(3)样本用量相对多。

发明内容

本发明的目的是提供一种适用于血液中苯丙胺类药物分析的QuEChERS前处理方法，该方法能有效提取血液样本中的苯丙胺、甲基苯丙胺、摇头丸等苯丙胺类相关物质，对复杂基质血液进行净化，消除血液中复杂的基质干扰，使得回收率大大增加，灵敏度显著提高，可以用于进行定性定量分析检测。

本发明的目的通过以下技术方案实现。

一种适用于血液中苯丙胺类药物分析的QuEChERS前处理方法，包括如下步骤：

1)向血液中加入提取试剂进行提取；所述提取试剂为含甲酸、甲醇、乙腈的混合有机试剂；

2)向步骤1)所得混合液中加入分离材料包，涡旋混合，离心；所述分离材料包含有研磨珠和无水硫酸镁；