[发明专利]快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用

权利要求书

1.快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，其特征在于：包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线包被有环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO: C201871的杂交瘤细胞株YTT-2产生，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体的重链可变区序列如SEQ ID NO:3所示，轻链可变区序列如SEQ ID NO:4所示。

2.根据权利要求1所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，其特征在于：所述的吸水垫长16 ～ 18mm，宽2 ～ 4mm；检测垫长25 ～ 30mm，宽2 ～4mm；金标垫长6 ～9mm，宽2 ～ 4mm；样品垫长12 ～ 18mm，宽2 ～ 4mm，相邻各垫的交叠长度为1 ～ 3mm；所述的吸水垫为吸水纸；所述的底板为纸板。

3.根据权利要求1所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，其特征在于：所述检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15 ～ 20mm，质控线和检测线的间距为5 ～ 10mm。

4.根据权利要求1所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，其特征在于：所述检测垫上每厘米检测线所需的环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物的包被量为80～400ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100 ～ 300ng。

5.根据权利要求1所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，其特征在于：所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15～20nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体的用量为100～200ng。

6.权利要求1所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析纸条的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1) 吸水垫的制备

将吸水纸剪裁得吸水垫；

(2) 检测垫的制备

检测线的包被：

将环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物用包被缓冲液配制成0.1 ～ 0.5mg/mL 的包被液；于距离硝酸纤维素膜上沿为15 ～ 20mm 的位置，用线喷方式将包被液横向包被于硝酸纤维素膜上得到检测线，每厘米检测线上所需环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物的包被量为80 ～400ng，然后于37 ～ 40℃条件下干燥60～ 120 分钟；

质控线的包被：

将兔抗鼠多克隆抗体用包被缓冲液配制成0.5mg/mL的包被液；于距检测线5～10mm的位置，用线喷方式将包被液横向包被于硝酸纤维素膜上，得到质控线，每厘米质控线上所需兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100 ～ 300ng，然后于37 ～ 40℃条件下干燥60 ～ 120 分钟；

(3) 样品垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37 ～ 40℃条件下干燥10 ～16 小时，得样品垫，然后置干燥器中室温保存；

(4) 金标垫的制备

将玻璃纤维膜放入封闭液中浸湿，取出，于37 ～ 40℃条件下干燥10 ～ 16 小时，于已干燥的玻璃纤维膜上，用点喷方式将纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体溶液横向进行喷涂，每厘米喷涂长度所需纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体为100～200ng，然后真空冷冻干燥2 ～ 6h，置干燥器中室温保存；所述的抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏号为CCTCC NO: C201871的杂交瘤细胞株YTT-2产生；

(5) 试纸条的组装

在底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，即得快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析纸条。