[发明专利]快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用

说明书

本发明公开了一种快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析纸条、制备及其应用。其包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下设置横向质控线和检测线，所述检测线包被有环匹阿尼酸‑卵清蛋白偶联物，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201871的杂交瘤细胞株YTT‑2产生。该试纸条用于检测环匹阿尼酸，具有检测快速、操作简单、灵敏度高的特点。

技术领域

本发明属生物检测领域，具体涉及快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用。

背景技术

环匹阿尼酸主要是由黄曲霉和寄生曲霉分泌产生的次生代谢产物，是一种能引起人畜各种损害的天然有毒化合物。环匹阿尼酸广泛存在于大米、玉米、花生、饲料等农产品和奶酪等食品中，污染食品及饲料后，会直接或间接进入食物链，威胁人畜的健康和生命安全。因此加强对农产品及食品中环匹阿尼酸的检测、特别是速测，以便及时了解和掌握食品及饲料的卫生信息。

现有技术中常用的环匹阿尼酸检测技术主要有薄层层析法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、免疫学分析法。前两种方法的样品前处理步骤耗时费力，仪器价格昂贵，且需要专业技术人员等的缺点。免疫学分析法克服了前两者的缺点，具有特异性强、灵敏度高、样品前处理简单、成本低、对实验人员和环境的污染危害小等优点。最常用的免疫学分析法有酶联免疫吸附法、纳米金免疫层析法等。目前还没有针对环匹阿尼酸免疫层析试纸条问世。因此，研究建立一种针对环匹阿尼酸免疫层析试纸条对于环匹阿尼酸的含量检测具有很重要的意义和应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条、制备及其应用。该试纸条用于检测环匹阿尼酸，具有检测快速，操作简单，灵敏度高的特点。

本发明为解决上述技术问题所采用的技术方案为：

快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析试纸条，包括底板，底板的一面从上到下依次粘贴吸水垫、检测垫、金标垫和样品垫，相邻各垫在连接处交叠连接，所述检测垫以硝酸纤维素膜为基垫，硝酸纤维素膜上自上而下横向设置质控线和检测线，所述检测线包被有环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物(CPA-OVA)，质控线包被有兔抗鼠多克隆抗体；所述金标垫横向喷涂有纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体，所述抗环匹阿尼酸单克隆抗体由保藏编号为CCTCC NO:C201871的杂交瘤细胞株YTT-2产生。

按上述方案，所述的吸水垫长16～18mm，宽2～4mm；检测垫长25～30mm，宽2～4mm；金标垫长6～9mm，宽2～4mm；样品垫长12～18mm，宽2～4mm，相邻各垫的交叠长度为1～3mm。

按上述方案，所述的吸水垫为吸水纸；所述的底板为纸板。

按上述方案，所述检测垫上的检测线与硝酸纤维素膜上沿的间距为15～20mm，质控线和检测线的间距为5～10mm。

按上述方案，所述检测垫上每厘米检测线所需的环匹阿尼酸-卵清蛋白偶联物(CPA-OVA)的包被量为80～400ng；每厘米质控线所需的兔抗鼠多克隆抗体的包被量为100～300ng。

按上述方案，所述金标垫中所用的纳米金的粒径为15～20nm；所述金标垫上每厘米喷涂长度所需的纳米金标记的抗环匹阿尼酸单克隆抗体的用量为100～200ng。

如上所述的快速检测环匹阿尼酸的胶体金免疫分析纸条的制备方法，包括以下步骤：

(1)吸水垫的制备

将吸水纸剪裁得吸水垫；

(2)检测垫的制备

检测线的包被：