[发明专利]一种刚地弓形虫泛素激活酶1（TgUba1）多克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及一种刚地弓形虫泛素激活酶1(TgUba1)多克隆抗体，所述多克隆抗体的编码序列为SEQ NO.1。本发明多克隆抗体效价高、特异性强。随后的Western blot实验以及IFA实验均证实，该多抗能特异性识别内源性TgUba1蛋白，这有利于TgUba1蛋白功能的进一步研究。不仅如此，以DAPI染核作为参照发现，TgUba1蛋白分布于胞质中。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是一种刚地弓形虫泛素激活酶1(TgUba1)多克隆抗体及其制备方法和应用。

背景技术

刚地弓形虫是一种世界范围内广泛分布的机会性致病原虫。目前对弓形虫病的治疗仍以药物为主，但均存在副作用强、治疗时间长、根治率低等缺陷。因此，寻找调控虫体生长发育关键的靶蛋白将为虫体致病机制研究、药物靶点研发提供理论依据。

蛋白质的泛素化是一个或多个泛素分子与靶蛋白共价连接，这一反应共有3种泛素酶参与，即泛素激活酶(E1)、泛素结合酶(E2)与泛素连接酶(E3)。其中，E1将泛素分子激活后，泛素途径得以启动，泛素再依次经E2与E3的相互作用，最终被转运至待降解靶蛋白残基上，从而形成泛素链标记的蛋白质底物，此过程即为蛋白泛素化修饰。

蛋白质泛素化是蛋白翻译后修饰的一种常见形式，在真核生物中，泛素化在蛋白质的定位、代谢、功能、调节和降解中都起着十分重要的作用，同时它也参与了细胞周期、增殖、凋亡、分化、转移、基因表达、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调控。

已经证实泛素化-蛋白酶体介导的蛋白质降解在弓形虫细胞分裂周期中具有重要作用，因为蛋白酶体的抑制严重破坏了复制的多个阶段，最近发布的弓形虫泛素组也揭示了许多泛素化蛋白质以周期依赖性的方式在转录水平受到调节。前期研究中，通过生物信息学分析，本申请人发现弓形虫基因组中有一个注释为泛素激活酶(ubiquitinactivating enzyme,E1或 Uba1)，本申请人曾采用同源重组方法试图敲除该基因，但并未成功，表明该蛋白是虫体生长发育过程中的关键基因。

因此，为了在后续研究中观察该蛋白的定位与功能，本发明以逆转录PCR(RT-PCR)扩增获得编码弓形虫Uba1(TgUba1)蛋白第210至750位氨基酸的编码基因片段，构建原核表达质粒，并利用表达的重组蛋白制备特异性兔抗TgUba1多克隆抗体。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供一种刚地弓形虫泛素激活酶1 (TgUba1)多克隆抗体及其制备方法和应用，该多克隆抗体效价高、特异性强。随后的Western blot实验以及IFA实验均证实，该多抗能特异性识别内源性TgUba1蛋白，这有利于TgUba1 蛋白功能的进一步研究。不仅如此，以DAPI染核作为参照发现，TgUba1蛋白分布于胞质中。

本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的：

一种刚地弓形虫泛素激活酶1(TgUba1)多克隆抗体，所述多克隆抗体的编码序列为SEQ NO.1。

如上所述的刚地弓形虫泛素激活酶1(TgUba1)多克隆抗体的制备方法，步骤如下：

⑴弓形虫速殖子的收集

复苏弓形虫速殖子，腹腔接种ICR小鼠，待小鼠出现病症后，处死，抽腹水传代接种新一批健康小鼠，转种3代后，收集小鼠腹腔液，3.0μm孔径滤膜过滤液体，室温1000×g离心10min，去上清，沉淀即为所需速殖子；

⑵目的基因片段的扩增