[发明专利]一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法

权利要求书

1.一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，包括：S1.提取自体脂肪间充质干细胞；S2.将间充质干细胞扩增后放入分化培养基，得到脂肪细胞，配制成脂肪细胞液，所述脂肪细胞液中包括脂肪细胞和少量未分化的干细胞，所述分化培养基包括葡萄糖15~25mM，纳米四氧化三铁颗粒60~500μg/mL，胰岛素15~25nM，青霉素50~70U/L，链霉素90~110U/L，余量为L-DMEM培养基；S3.将脂肪细胞液同Ⅰ型胶原蛋白混合，得到组织材料。

2.根据权利要求1所述的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，所述培养基中包括葡萄糖20~25mM，纳米四氧化三铁颗粒200~500μg/mL，胰岛素20~25nM，青霉素60~70U/L，链霉素100~110U/L，余量为L-DMEM培养基。

3.根据权利要求2所述的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，所述培养基中包括葡萄糖20mM，纳米四氧化三铁颗粒200μg/mL，胰岛素20nM，青霉素60U/L，链霉素100U/L，余量为L-DMEM培养基。

4.根据权利要求1所述的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，所述纳米四氧化三铁颗粒为改性四氧化三铁。

5.根据权利要求4所述的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，所述纳米四氧化三铁的改性方法为：S11.在氩气中于75~90℃下，向FeCl₂和FeCl₃的混合溶液中加入NaOH溶液，经剧烈搅拌3~4h得到Fe₃O₄，加入0.1~0.2g/mL聚乙烯亚胺，得到所述Fe₃O₄纳米颗粒，其中聚乙烯亚胺与述Fe₃O₄纳米颗粒的质量比为1~2:100； S12.将二氧化钛、乙酐和环戊烷按1：2~3：7~8的体积比混合均匀，然后加热到75~80℃，再在该温度下恒温1~2h，高速离心分离，固体物用丙酮洗涤3~5次，得到钛氧有机物粉末，将钛氧有机物粉末与0.6~0.8mol/L的硝酸溶液混合，搅拌，使钛氧有机物充分溶解，得到混合液，其中钛氧有机物的质量浓度为2~3%；S13.将上述Fe₃O₄纳米颗粒，加入上述混合液中，以200~250rpm的速度搅拌，使整个体系分散均匀，升温使溶液温度达到65~70℃，搅拌反应2~4h，离心分离，75~80℃真空干燥，研磨，制得改性纳米四氧化三铁，其中Fe₃O₄和TiO₂的质量比为5~10:1。

6.根据权利要求5所述的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，其特征在于，将改性纳米四氧化三铁加入到80%~90%的乙醇中，超声分散后，加入氨水和正硅酸乙酯，搅拌12~24h后离心分离，取固体物质，进行洗涤，得到硅改性纳米四氧化三铁，离心分离前，改性四氧化三铁为0.2~0.4%，氨水8~10%，正硅酸乙酯2~3%，余量为乙醇和去离子水；将硅改性纳米四氧化三铁超声分散在40~50%的乙醇中，搅拌后干燥，对产物在600~650℃下进行煅烧，得到改性纳米四氧化三铁的粉末。