[发明专利]一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法

说明书

本发明涉及干细胞领域，提供一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法，用于解决身体凹陷处组织填充易产生排异反应的问题。本发明提供的一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法方法，包括：S1.提取自体脂肪间充质干细胞；S2.将间充质干细胞扩增后放入分化培养基，得到脂肪细胞，配制成脂肪细胞液，所述脂肪细胞液中包括脂肪细胞和少量未分化的干细胞，所述分化培养基包括葡萄糖15~25mM，纳米四氧化三铁颗粒60~500μg/mL，胰岛素15~25nM，青霉素50~70U/L，链霉素90~110U/L，余量为L‑DMEM培养基；S3.将脂肪细胞液同Ⅰ型胶原蛋白混合，得到组织材料。通过脂肪间充质干细胞的分化，可以得到足量的脂肪组织用于填充，同时获得的脂肪细胞的活性高，且较为完整，填充手术的成功率高。

技术领域

本发明涉及干细胞领域，具体涉及一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法。

背景技术

由于种族、遗传、意外事故及营养等原因，部分人身体上可能存在一定的凹陷。填充术，即在身体的凹陷处填充一定的组分，可以立竿见影产生消除凹陷的效果。目前，目前国内外医学凹陷填充的方法大致可分为注射法和手术法。注射法使用的材料有自体脂肪颗粒；而手术法则使用硅胶囊假体置入凹陷处。

自体脂肪注射已开展多年，但因其超过50％的吸收率及可能存在脂肪液化、感染、血肿等并发症，注射脂肪液化所引起的囊肿亦可干扰肿瘤的诊断，限制了该技术的应用。移植过程中脂肪细胞的损伤，受区早期血液循环建立的状况，移植的脂肪细胞因缺血、缺氧而液化，成熟的脂肪细胞没有增殖能力等，都是脂肪填充亟需解决的问题。同时自体脂肪存在老化和损伤等问题，不易作为脂肪源进行填充。

假体置入法填充，根椐硅胶弹性膜内的材料不同，可分为硅凝胶假体和盐水充注式假体。由于假体是异物，植入后导致各种并发症的发生。填充术后假体包膜挛缩是术后最常见的并发症，硅胶弹性膜做为一种异物置入人体后引起局部组织反应，形成纤维包膜。

发明内容

本发明解决的技术问题为身体凹陷处组织填充易产生排异反应的问题，提供一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供的技术方案为：

一种富集自体干细胞填充凹陷的组织材料制备方法方法，包括：S1.提取自体脂肪间充质干细胞；S2.将间充质干细胞扩增后放入分化培养基，得到脂肪细胞，配制成脂肪细胞液，所述脂肪细胞液中包括脂肪细胞和少量未分化的干细胞，所述分化培养基包括葡萄糖15~25mM，纳米四氧化三铁颗粒60~500μg/mL，胰岛素15~25nM，青霉素50~70U/L，链霉素90~110U/L，余量为L-DMEM培养基；S3.将脂肪细胞液同Ⅰ型胶原蛋白混合，得到组织材料。

采用的脂肪间充质干细胞是源于患者自身，因此培育出的脂肪细胞作为填充物可以尽可能减少排异反应，提高填充手术的成功率，同时脂肪细胞液中不可避免的会保留一定量的干细胞，这些干细胞对凹陷填充后，机体同填充物的结合有着较为重要的作用；同时采用纳米四氧化三铁和胰岛素作为诱导因子，诱导效果更好。

通过脂肪间充质干细胞的分化，可以得到足量的脂肪组织用于填充，同时获得的脂肪细胞的活性高，且较为完整，填充手术的成功率高。

优选地，所述培养基中包括葡萄糖20~25mM，纳米四氧化三铁颗粒200~500μg/mL，胰岛素20~25nM，青霉素60~70U/L，链霉素100~110U/L，余量为L-DMEM培养基。。

优选地，所述培养基中包括葡萄糖20mM，纳米四氧化三铁颗粒200μg/mL，胰岛素20nM，青霉素60U/L，链霉素100U/L，余量为L-DMEM培养基。该优选的纳米四氧化三铁的投加量可以更快的诱导干细胞转换为脂肪细胞。

优选地，所述纳米四氧化三铁颗粒为改性四氧化三铁。改性的四氧化三铁可以更好的诱导干细胞转换为脂肪细胞。