[发明专利]一种基于点击化学的三维DNA微阵列表面的制备方法

说明书

本发明提供了一种基于点击化学的三维DNA微阵列表面的制备方法，包括：在固体表面上利用图案化裂解方式形成图案化反应基团微阵列；对反应基团于图案化反应基团微阵列上进行固定得到反应基团微阵列；将反应性功能高分子于反应基团微阵列上共价固定形成三维反应性高分子微阵列；对带反应基团的DNA引物于三维反应性高分子微阵列上进行共价固定形成三维DNA引物微阵列表面，其中，共价固定反应性功能高分子和DNA引物至少一种采用点击化学法固定。本发明基于点击化学法利用三维表面反应性高分子来形成三维反应性高分子微阵列流动池表面，进一步可构建DNA引物三维表面结构，制备方法简单快捷，且制备效率高。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，尤其涉及一种基于点击化学的三维DNA微阵列表面的制备方法。

背景技术

DNA测序正在推动基因组学研究和发现，将要广泛应用的精准医疗，个人医学也要依靠DNA测序来实现。长达10多年(1990-2003)的人类基因组计划的不朽业绩是由全世界很多基因中心的很多科学家用第一代Sanger DNA测序技术来完成的，中国科学家参与了大约1％的工作。第一代基因测序至今还是重要的基因测序方法，是基于Sanger的双脱氧终止剂的DNA测序技术，用荧光标记的双脱氧终止剂来进行DNA测序。

测序用流动池的表面化学是高通量基因测序仪的关键，图案化流动池可以大大提供测序通量。基于荧光检测的高通量基因测序仪的流动池是用高透明性的材料(比如玻片等等)作为基底组成。透明基底要用化学方法或/和物理方法进行表面活化，然后在基底表面上就地形成或共价固定住反应性高分子形成三维反应性高分子表面。随后再在反应性高分子上共价固定反应性DNA引物形成DNA引物三维表面。利用三维表面高分子来形成DNA引物三维表面结构可以形成高密度的DNA引物结构，这样的表面可以产生高信噪比的测序信息来进行高通量DNA测序。

现有的三维表面化学的制备方法中，存在固定方法繁琐，固定效率低的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供一种基于点击化学的三维DNA微阵列表面的制备方法以解决现有技术的不足。

为解决上述问题，本发明提供一种基于点击化学的三维DNA微阵列表面的制备方法，包括：

在固体表面上，利用图案化裂解方式，形成图案化反应基团微阵列；

对反应基团于所述图案化反应基团微阵列上进行固定，得到反应基团微阵列；

将反应性功能高分子于所述反应基团微阵列上共价固定，形成三维反应性高分子微阵列；

对带反应基团的DNA引物于所述三维反应性高分子微阵列上进行共价固定，形成三维DNA引物微阵列表面；

其中，共价固定反应性功能高分子和共价固定带反应基团的DNA引物的方法中，至少一种采用点击化学法固定。

优选地，所述“在固体表面上，利用图案化裂解方式，形成图案化反应基团微阵列”包括：

利用3-氨基丙基三甲氧基硅烷，于所述固体表面上形成NH₂基团，得到具NH₂基团表面；

在所述具NH₂基团表面上共价固定可光裂解反应化合物，构建包含反应后生成的可光裂解小分子官能团的可光裂解基团表面；

对所述可光裂解基团表面进行图案化光解，形成所述图案化基团微阵列。

优选地，所述“对反应基团于所述图案化反应基团微阵列上进行固定，得到反应基团微阵列”包括：

取含有反应基团的化合物置于作为反应试剂的无水二甲基甲酰胺中；

加入三乙胺，得到第一混合溶液；