[发明专利]一种与硼砂特异性结合的核酸适配体在审
| 申请号： | 201910371568.7 | 申请日： | 2019-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN110066804A | 公开（公告）日： | 2019-07-30 |
| 发明（设计）人： | 韩芹芹;靖乐;夏雪山;宋玉竹;张金阳;王炳辉 | 申请（专利权）人： | 昆明理工大学 |
| 主分类号： | C12N15/115 | 分类号： | C12N15/115;C12Q1/6806;G01N33/53 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 650500 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 核酸适配体 硼砂 特异性结合 吉布斯自由能 生物医学技术 核苷酸序列 核苷酸组成 拓扑学结构 二级结构 高亲和力 重要意义 单链DNA 直链状 鉴别 残留 筛选 检测 预测 | ||
1.一种与硼砂特异性结合的核酸适配体，其特征在于，所述与硼砂特异性结合的核酸适配体核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示；该核酸适配体为单链DNA，由82个核苷酸组成，拓扑学结构为直链状。
2.如权利要求1所述的与硼砂特异性结合的核酸适配体，其特征在于，预测的二级结构具有突出的环和茎，吉布斯自由能DG＝-15.21。
3.一种如权利要求1所述的与硼砂特异性结合的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，所述与硼砂特异性结合的核酸适配体的筛选方法采用SELEX技术筛选出能够与硼砂特异性结合的核酸适配体群体，设计引物进行PCR扩增、克隆、分离和测序；利用酶联寡核苷酸吸附实验进行验证，得到适配体Bor-A01。
4.如权利要求3所述的与硼砂特异性结合的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，适配体的接头引物序列为：Aptamer Fw：GACATATTCAGTCTGACAGC；反向互补序列：CGCTGTCAGACTGAATATGTC；Aptamer Rv:GCTAGACGATATTCGTCCATC，反向互补序列：GATGGACGAATATCGTCTAGC；所获阳性单克隆进行核苷酸序列测定，测序结果表明与硼砂特异性结合的核酸适配体由82个核苷酸组成，5’端至3’端序列为：
GACATATTCAGTCTGACAGCGGAAGCGGGTCAGTCCAACTCACGGTCTCGCATGCACGGGAGATGGACGAATATCGTCTAGC。
5.如权利要求3所述的与硼砂特异性结合的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，得到适配体Bor-A01后还需进行核酸适配体单链DNA二级结构表征，
使用MFOLD软件对与硼砂特异性结合的核酸适配体Bor-A01单链DNA分子进行二级结构预测；二级结构具有突出的环和茎，吉布斯自由能DG＝-15.21。
6.如权利要求3所述的与硼砂特异性结合的核酸适配体的筛选方法，其特征在于，硼砂包被原的制备包括：
通过化学法将硼砂分子与BSA偶联获得硼砂的包被原，用于后续的酶联寡核苷酸吸附测定法中；通过紫外吸收光谱判断包被原的制备情况。
7.一种盛装有如权利要求1所述与硼砂特异性结合的核酸适配体的在识别硼砂或在制备检测硼砂的试剂盒。
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