[发明专利]一种防治根结线虫的复合微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种防治根结线虫的复合微生物菌剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)菌种培养：先将花生根系内部的非致病尖孢镰刀菌纯化、培养，得到非致病尖孢镰刀菌菌种，备用；

(2)载体准备：将花生秧粉、松针粉、凹凸棒土加入二甲基亚砜-乙醇混合液中，加热搅拌，过滤，洗涤除去二甲基亚砜，干燥，研磨过筛，灭菌处理，得到载体，备用；

(3)载体预处理：先将步骤(1)所得非致病尖孢镰刀菌种无菌接种至PDA培养基中，培养4～5天，然后向其中倒入步骤(2)所得载体，继续搅拌培养10～12天，得到预处理载体，备用；

(4)复合菌粉的制备：先将蜡样芽孢杆菌ACCC02368、根瘤菌ACCC01041、凝结芽孢杆菌ACCC00403、哈茨木霉ACCC30423菌株分别单独进行接种培养、絮凝、压滤、干燥及粉碎，得到相应的菌粉，同时将步骤(1)所得非致病尖孢镰刀菌菌种也经絮凝、压滤、干燥及粉碎，得到其相应的菌粉，然后将所得菌粉进行混合，得到复合菌粉；

(5)最后将步骤(4)所得复合菌粉与步骤(3)所得预处理载体混合均匀，即得所述复合微生物菌剂；

其中，步骤(4)中，蜡样芽孢杆菌ACCC02368、根瘤菌ACCC01041、凝结芽孢杆菌ACCC00403、哈茨木霉ACCC30423的菌粉与非致病尖孢镰刀菌的菌粉依次以质量比1：0.3～0.4：0.3～0.5：0.2～0.3：0.8～1进行混合。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，培养条件为：在25～28℃温度条件下，于121℃灭菌20～30分钟后的平板培养基中培养3～5天。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，花生秧粉、松针粉、凹凸棒土、二甲基亚砜-乙醇混合液的质量体积比约为1g：0.2～0.3g：8～10g：20～22mL，其中，二甲基亚砜-乙醇混合液中两者的体积比为1：0.4～0.5。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，加热搅拌的工艺条件为：70～80℃搅拌5～6小时。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，培养温度为25～28℃。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，非致病尖孢镰刀菌种与载体的体积质量比为1μl：30～40mg。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)中，蜡样芽孢杆菌ACCC02368、凝结芽孢杆菌ACCC00403接种于肉汁胨培养基，根瘤菌ACCC01041、哈茨木霉ACCC30423菌株接种于PDA培养基，培养4～6天后，分别于170～180r/min摇床培养，各自的培养条件如下：蜡样芽孢杆菌ACCC02368的培养温度为27～29℃，培养时间为40～45小时；凝结芽孢杆菌ACCC00403的培养温度为28～30℃，培养时间为45～48小时；根瘤菌ACCC01041的培养温度为27～29℃，培养时间为40～45小时；哈茨木霉ACCC30423的培养温度为27～29℃，培养时间为72～75小时。

8.一种利用权利要求1～7中任一项所述制备方法得到的一种防治根结线虫的复合微生物菌剂。

9.一种权利要求8所述微生物菌剂在防治根结线虫病中的应用。