[发明专利]一种短小芽孢杆菌抗菌活性物质的制备方法及应用

说明书

本发明涉及一种短小芽孢杆菌抗菌活性物质的制备方法及应用。一株短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)BP，该菌株已于2019年3月21日保存在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏编号CGMCC NO.17424；本发明还涉及利用该菌株制备抗菌活性物质及相关的应用。本发明首次从短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)中提取出三种具有抗菌活性的脂肪醇类化合物，而现有短小芽孢杆菌中并未发现上述三种抗菌活性物质。

技术领域

本发明涉及一种短小芽孢杆菌抗菌活性物质的制备方法及应用，属于微生物技术及应用技术领域。

背景技术

目前，畜禽养殖业抗生素的大量使用，导致耐药性产生及兽药残留，严重影响了畜产品品质，排泄残渣也导致土壤和水体污染。破坏了生态环境，直接危害人类健康。环境污染造成了人类生存环境的恶化，导致食品安全问题日益突出。

抗菌活性物质是近年来国内外的研究热点，可广泛应用于生物饲料、生防、医药、天然食品防腐剂、化妆品等方面。其中芽孢杆菌可产生多种抗菌物质，其抗菌机理独特，对革兰阴性菌、革兰阳性菌、霉菌及酵母菌均有抑制作用，具有广谱抗菌、高效、安全、不易产生耐药性、易降解等特点，自Johnson等报道枯草芽孢杆菌可以产生抑菌物质以来，国内外学者先后从不同芽孢杆菌中分离得到多种抑菌物质，包括多肽类、脂肽类及抑菌蛋白类等。

短小芽孢杆菌为芽孢杆菌属的一种，广泛存在于自然界中，显微镜下观察营养细胞为杆状，革兰氏反应阳性，能运动。菌落形态分为半透明状和不透明状两种。短小芽孢杆菌能够分泌活性很强的纤维素酶、脂肪酶、木聚糖酶和果胶裂解酶等，有利于降解大分子物质。还可以产生抗菌素及抗菌蛋白等拮抗性物质，抑菌范围广，对多种病原菌都有抑制作用。

目前，国内已有关于生产短小芽孢杆菌类产品的相关技术，如:中国专利文献CN103563991A(申请号201210271396.4)公开了水稻稻瘟病生防菌短短小芽孢杆菌杀菌剂水分散粒剂剂型和制备方法。所述固体的水分散粒剂包含短短小芽孢杆菌TW菌株原粉(2×10¹²cfu/g)和助剂，助剂包括载体、分散剂、湿润剂、崩解剂、光保护剂和粘结剂；其加工方法是将有效成分和助剂探子一定比例混合，经气流粉碎、造粒、干燥获得。

中国专利文献CN105494441A(申请号200710021509.1)公开了一种含有芽孢萌发剂的短小芽孢杆菌的可湿性粉剂及其制备方法，该可湿性粉剂的原料由下列重量组份组成：短小芽孢杆菌发酵液40-70份；填料：膨润土20-30份；润湿剂：聚乙二醇1-4份；分散剂：十二烷基硫酸钠0.2-1份；芽孢萌发剂：L-丙氨酸0.1-0.5份，2，6-吡啶二羧酸钙0.1-0.5份；紫外保护剂：羧甲基纤维素0.5-2份，β-糊精0.2-1份；干燥保护剂：麦芽糖1-4份，谷氨酸钠0.2-1份。

中国专利文献CN103205383A(申请号201310128271.0)公开了一种短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)E14 CGMCC No.6682。本发明还公开了短小芽孢杆菌E14的培养方法，其步骤：将短小芽孢杆菌E14菌株接种到2216E液体培养基中，28℃、150rpm培养20h，即得菌液。本发明所述的短小芽孢杆菌E14或所述的方法培养得到的菌液具备抑制哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的抑菌用途，可以用于虾蟹养殖药物的制备，或者用于作为抑菌药物添加到虾蟹养殖饲料中。

中国专利文献CN102965299A(申请号201210290374.2)公开了一株短小芽孢杆菌LD-b1的发酵工艺及其在防治黄瓜褐斑病，黄瓜灰霉病，黄瓜菌核病，苹果腐烂病，茄子枯萎病，小麦赤毒病,白菜黑斑病和番茄灰霉病上的应用。曲发斌等考察了短小芽孢杆菌发酵液对番茄种子萌发及幼苗生长的影响，结果表明:短小芽孢杆菌发酵液对番茄种子萌发,根芽生长及幼苗的株高和株重具有明显的促进作用，其中以50倍稀释液的效果最为显著,而在幼苗施用方式上叶面喷施的效果明显优于灌根和浸种。