[发明专利]基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法

权利要求书

1.基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备

取天然植物抗球虫饲料添加剂样品，用甲醇溶解，超声处理，滤过，收集滤液，将滤液蒸干，向残渣中加入甲醇复溶并用微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液；

2)3种对照品溶液的制备

以甲醇为溶剂，分别配制绿原酸对照品溶液、咖啡酸对照品溶液和橙皮苷对照品溶液，浓度分别为0.5～1.5mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml；

3)HPLC检测

色谱条件：AgilentSB-C18色谱柱，规格4.6mm×250mm，5μm；检测波长322-375nm；柱温30-45℃；进样量：5-15μl；流动相A：乙腈，流动相B：0.1％磷酸溶液，流动相A和流动相B浓度之和为100％，进行梯度洗脱；流速0.5-1ml·min^-1；

洗脱条件：

0-10min，流动相A：10-15％，流动相B：90-85％；

10-20min，流动相A：15-18％，流动相B：85-82％；

20-30min，流动相A：18-20％，流动相B：82-80％；

30-40min，流动相A：20-30％，流动相B：80-70％；

40-45min，流动相A：30-10％，流动相B：70-90％；

45-47min，流动相A：10％，流动相B：90％；

将供试品溶液注入高效液相色谱仪，得到HPLC指纹图谱；同时分别用3种对照品溶液进样，确定绿原酸、咖啡酸和橙皮苷的出峰位置；测定结果为：共计18个共有峰，其中3、5、11号峰，分别为绿原酸、咖啡酸、橙皮苷，且3号峰为内参照峰，其余15个峰为特征指纹峰；各个峰的相对保留时间分别为3.108、3.988、10.029、10.655、12.672、15.343、18.867、22.379、24.182、28.575、35.540、37.646、38.315、40.767、41.486、41.899、42.551、43.573，平均相对峰面积比分别为2320.555、643.841、9545.936、633.801、4930.843、719.967、1044.565、5439.596、1193.835、812.337、703.755、6692.912、10358.90、8624.709、436.598、833.476、2554.748、7052.612；

步骤1)中取天然植物抗球虫饲料添加剂样品2g，用甲醇10-30ml溶解，60W、45Hz超声处理15-30min；残渣加入甲醇1-3ml复溶，作为供试品溶液。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、供试品溶液的制备

取天然植物抗球虫饲料添加剂样品2g，用甲醇20ml溶解，60W、45Hz超声处理20min；然后滤过，收集滤液，将滤液蒸干，向残渣中加入甲醇2ml复溶，作为供试品溶液；

S2、3种对照品溶液的制备

以甲醇为溶剂，分别配制绿原酸对照品溶液、咖啡酸对照品溶液和橙皮苷对照品溶液，浓度分别为1mg/ml、0.5mg/ml和1mg/ml；

S3、HPLC检测

色谱条件：AgilentSB-C18色谱柱，规格4.6mm×250mm，5μm；检测波长355nm；柱温40℃；进样量：10μl；流动相A：乙腈，流动相B：0.1％磷酸溶液，流动相A和流动相B浓度之和为100％，进行梯度洗脱；流速0.8ml·min^-1；

洗脱条件：

0-10min，流动相A：10-15％，流动相B：90-85％；

10-20min，流动相A：15-18％，流动相B：85-82％；

20-30min，流动相A：18-20％，流动相B：82-80％；

30-40min，流动相A：20-30％，流动相B：80-70％；

40-45min，流动相A：30-10％，流动相B：70-90％；

45-47min，流动相A：10％，流动相B：90％。