[发明专利]基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法

说明书

本发明提供一种基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法，包括供试品溶液的制备，绿原酸、咖啡酸、橙皮苷3种对照品溶液的制备以及HPLC检测。本发明共标定了18个共有峰，其中指认3个已知峰。本发明首次采用建立HPLC指纹图谱的方法鉴别天然植物抗球虫饲料添加剂产品，该方法建立的天然植物抗球虫饲料添加剂HPLC指纹图谱与对照图谱的相似度均在90％以上，能有效表征其特点，有利于全面监控产品质量。本发明技术含量高，避免了质量控制的单一性和片面性；同时该方法操作简单，重复性好，可信度高，便于药材加工、销售企业和质检单位推广应用。

技术领域

本发明涉及高效液相色谱检测技术，具体地说，涉及一种基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法。

背景技术

在禽类养殖中，球虫病是严重危害养殖业的疾病之一，该病的发生率极高，分布范围广，其病死率可达40％～80％。爱绿爽是北京爱绿生物科技有限公司生产的一种安全高效、无残留、不易产生耐药性的抗球虫饲料添加剂(参见ZL201410832060.X，发明名称：一种天然植物抗球虫饲料添加剂及其应用)。该饲料添加剂能有效抑杀球虫的孢子、第一代及第二代裂殖体，降低其发病率及避免发病区域继续扩大；同时提高机体免疫与抗病力，降低病原球虫对机体的侵染；保护和修复受损胃肠粘膜，促进营养物质的吸收，具有抑杀球虫、增强免疫力、修复胃肠道三重功效，该产品绿色环保，适合在畜牧业领域大力推广。

指纹图谱是指某种天然植物或者植物提取物中所共有的、具有特征性的某类或数类成分的色谱或者光谱的图谱。爱绿爽为天然植物提取物复方产品，在现阶段，天然植物有效成分绝大多数没有明确的情况下，HPLC指纹图谱对于天然植物或者植物提取物的质量显得格外重要。因此，建立天然植物抗球虫饲料添加剂的HPLC指纹图谱，对于产品的质量检验意义重大。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法。

本发明构思如下：天然植物抗球虫饲料添加剂(爱绿爽产品)中，含有黄芪提取物、青蒿提取物、常山提取物、仙鹤草提取物、杜仲提取物、蒲公英提取物、苍术提取物、桑叶提取物、芦荟提取物、陈皮提取物、山楂提取物、甘草提取物等，根据产品抗球虫机理，其中有效成分主要为橙皮苷(原药材陈皮)、咖啡酸(原药材蒲公英)、绿原酸(原药材蒲公英)、芦荟苷(原药材芦荟)、黄芪甲苷(原药材黄芪)、青蒿素(原药材青蒿)、常山碱(原药材常山)、甘草酸(原药材甘草)等，通过待测样品前处理及高效液相色谱流动相梯度洗脱后，得到天然植物抗球虫饲料添加剂HPLC指纹图谱18个共有峰，其中3个已知峰分别对应于绿原酸、咖啡酸、橙皮苷，其余15个峰为特征指纹峰。

为了实现本发明目的，本发明提供一种天然植物抗球虫饲料添加剂HPLC指纹图谱的建立方法及其指纹图谱，其是以绿原酸、咖啡酸、橙皮苷这3种成分作为特征成分为参照，采用高效液相色谱法测定其指纹图谱。所述方法包括制备供试品、对照品溶液，梯度洗脱以及指纹图谱建立、对照图谱生成、特征峰指认、相似度计算等步骤。

本发明提供的基于HPLC指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法，具体包括以下步骤：

1)供试品溶液的制备

取天然植物抗球虫饲料添加剂样品，用甲醇溶解，超声处理，滤过，收集滤液，将滤液蒸干，向残渣中加入甲醇复溶并用微孔滤膜过滤后，作为供试品溶液；

2)3种对照品溶液的制备

以甲醇为溶剂，分别配制绿原酸对照品溶液、咖啡酸对照品溶液和橙皮苷对照品溶液，浓度分别为0.5～1.5mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml，优选浓度分别为1mg/ml、0.2～0.8mg/ml和0.5～1.5mg/ml；

3)HPLC检测