[发明专利]鉴别鸡快慢羽基因型的方法

说明书

本发明提供一种鉴别鸡快慢羽基因型的方法。该方法包括：提取待测鸡的基因组DNA为模板，利用引物对(SEQ ID NO:1‑2)进行PCR扩增，获得扩增产物，然后用BbvCI内切酶对扩增产物进行酶切，根据酶切产物的片段大小判断快慢羽基因型。本发明提供的检测引物特异性好，内切酶效率高，结果清晰，鉴别准确率高，且能够解决快慢羽鉴别受时间限制的问题。本发明能够准确鉴别鸡的快慢羽以及慢羽的纯合与杂合型，根据获得的基因型可以快速建立雏鸡自别雌雄配套系。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体地说，涉及一种鉴别鸡快慢羽基因型的方法。

背景技术

现代养鸡生产中采用多种方法区分初生雏鸡的性别，主要有翻肛鉴别法、金银羽自别雌雄法、快慢羽自别雌雄法等。快慢羽自别雌雄法与金银羽自别雌雄法相比，有其优点，这种方法不受羽色限制，只要父本和母本组合正确，对任何羽色的初生雏鸡都可以使用，而金银羽自别雌雄法，只能在金色羽父本配银色羽母本时，所产初生雏才可以自别。快慢羽自别雌雄法与翻肛鉴别法相比也有很多优点，首先更直观快捷，只需在雏鸡出壳后，用肉眼观察翅膀上的羽毛生长速度即可，其次雏鸡的应激反应小，不易对其造成伤害，而且简便易学，是目前广泛使用的自别雌雄的方法。

但快慢羽自别雌雄法也有其适用条件，只有在分别选育出快羽纯系和慢羽纯系，并进行合理的杂交配套，其后代初生雏鸡才能进行快慢羽自别雌雄。在培育快羽纯系和慢羽纯系的过程中，最初的方法是根据表型鉴别，最适宜的鉴别时间是出雏后24h内，将主翼羽长于覆主翼羽2mm以上的表型划分为快羽型，其余的全归为慢羽型。根据表型鉴别存在一定的局限性，首先是有最佳鉴别时间限制；第二是公鸡的慢羽表型有纯合和杂合两种基因型，所以仅凭表型鉴别需要至少两个世代才能培育出慢羽纯系，这样培育快慢羽自别雌雄配套系所需的时间就长，迫切需要用分子生物学方法鉴别鸡快慢羽基因型，缩短慢羽纯系培育时间、降低养殖成本。

快慢羽的分子鉴定最早是利用与内源性病毒ev21(Endogenous Virus21)之间的相关性，设计了特异性引物，利用PCR技术检测是否有ev21插入来确定快慢羽表型，但ev21在不同品种中与羽速基因的连锁程度存在差异，并未达到理想的遗传标记效果。荷兰学者Elferink 2008年提出PRLR(prolactin receptor，促乳素受体)和SPEF2(Sperm FlagellarProtein2，编码精子鞭毛蛋白2)基因串联的重复片段导致慢羽的形成，然而，黄卓林(鸡慢羽基因的精细定位与候选基因研究，2014年，中国农业大学硕士学位论文)发现国内一些地方鸡种虽然也含有重复片段，但是其表型却是快羽，因此利用重复片段来鉴别鸡快慢羽的方法有待改进。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴别鸡快慢羽基因型的新方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供用于鉴别鸡快慢羽基因型的引物对，包括正向引物F和反向引物R，它们的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:1和2所示。

第二方面，本发明提供含有所述引物对的检测试剂或试剂盒。

第三方面，本发明提供所述引物对或含有所述引物对的检测试剂或试剂盒的以下任一应用：

i)用于鉴别鸡快慢羽基因型；

ii)用于雏鸡雌雄鉴别。

第四方面，本发明提供用于鉴别鸡快慢羽基因型的方法，提取待测鸡的基因组DNA为模板，利用所述引物对进行PCR扩增，获得扩增产物，然后用BbvCI内切酶对扩增产物进行酶切，根据酶切产物的片段大小判断快慢羽基因型。

所述基因型的判断标准如下：酶切产物出现452bp和499bp两条特征条带，为快羽纯合基因型；酶切产物仅出现951bp一条特征条带，为慢羽纯合基因型；酶切产物出现452bp、499bp和951bp三条特征条带，为慢羽杂合基因型。

进一步地，采用琼脂糖凝胶电泳的方法检测酶切后产物片段的大小。