[发明专利]一种外标多点法测定香稻叶片2-乙酰-1-吡咯啉含量的气相质谱联用方法

说明书

本发明涉及食品检测领域，公开了一种外标多点法测定香稻叶片2‑乙酰‑1‑吡咯啉含量的气相质谱联用方法，包括S1：采样；S2：叶片前处理和称样量；S3：固相微萃取前处理；S4：气质联用分析；S5：2‑乙酰‑1‑吡咯啉外标多点法建立；S6：相对回收因子RRF建立；S7：公式计算。本发明所得到的样品的数据重复性标准差（指用的同一根萃取头）小于1.5%，再现性标准差小于8.5%，样品检出浓度为0.0035 mg/kg，定量检出限（S/N=10）为0.001mg/Kg。本发明所提出的方法具有简便，快速，准确，低成本和高效，在香稻品质早期鉴定，香味基因遗传研究和育种早世代筛选中均具有良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及食品检测领域，尤其涉及一种外标多点法测定香稻叶片2-乙酰-1-吡咯啉含量的气相质谱联用方法。

背景技术

香稻，其香沁人而深受消费者喜欢，市场上优质香米售价也远高于普通稻米。中国香稻品种众多，香稻中香味挥发物有200余种，其中的2-乙酰-1-吡咯啉(2AP)是主要的香味特征挥发物（Lin et al., 1990；Ahmed et al., 1995；Tanchotikul and sieh，1991；Maraval et al，2008；Mathure et al，2014) ，呈爆米花香型。

国内外开展稻米气味分析已有20余年，稻米气味的采集中大多数文献采用同步蒸馏-萃取法和吸附剂捕集法，这些方法存在操作步骤繁杂、样品和试剂消耗量大、费时费力、目标干扰物较多等缺点。近期也有采用手动固相微萃取技术，虽是直接从样品基体中提取目标物，集萃取、分离、浓缩、进样于一体，没有有机试剂消耗的技术，且具有操作简便，但由于要收集后再移入气相进样，这转移过程中存在目标物损失的风险，从而降低样品特征物的浓度。如，国内应兴华等(分析测试学报，2011，27，69-71)报道用手动固相微萃取后转移至气相进样口，转移过程易出现损失；且采用样品的量是8 g，提取时间是0.2 h，取样量大且易造成提取不充分等。且对香味主要特征物2AP的定量多采取米粉形式（应兴华等，色谱，2010，28(8):782-785；孙谦等，食品安全质量检测学报，2016，7(3):2011-2015）和利用单点2,4,6三甲基吡啶(TMP)作为内标来定量计算（余碧钰等，光谱实验室，2000，17(6):638-642；应兴华等，色谱，2010，28(8):782-785；应兴华等，分析测试学报，2011，27,69-71；黄忠林等，中国农业学报，2012(6):1054-1065；杨晓娟等；华北农学报，2014，29(3):128-135；李艳红等，华北农学报，2014，29(1):159-164；莫钊文等，华南农业大学学报，2015，36(3):45-48；孙谦等，食品安全质量检测学报，2016，7(3):2011-2015）。

利用TMP作为内标，通过计算2AP与TMP内标物的面积比值来计算2AP的含量，2AP目标物与TMP内标虽在不同时间出峰，没有交叠，且性质和分子量也类似；但在一定体积的顶空瓶中固相微萃取时，此瓶中加热后挥发的目标物2AP浓度未必与TMP内标物浓度成一固定比例。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种外标多点法测定香稻叶片2-乙酰-1-吡咯啉（2AP）含量的气相质谱联用方法，本发明不仅采用自动固相微萃取前处理，且采用叶片形式，用2-乙酰-1-吡咯啉外标多点法标准曲线来定量计算样品中的2-乙酰-1-吡咯啉含量，能够在早期就对香稻植株进行香与非香的鉴别，且准确性好，精密度高（方法的连续精密度相对标准差小于1.5 %，中间精密度的相对标准差小于8.5%），样品检出浓度低至0.0035 mg/Kg。

本发明的具体技术方案为：一种外标多点法测定香稻叶片2-乙酰-1-吡咯啉含量的气相质谱联用方法，包括以下步骤：

S1：采样；

S2：叶片前处理和称样量；

S3：固相微萃取前处理；

S4：气质联用分析；