[发明专利]一种酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的工艺

说明书

本发明公开了一种酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的工艺，通过使用蛋白酶将脱脂蝇蛹蛋白粉酶解，出人意料地获得了具有良好抗氧化活性的多肽。

技术领域

本发明涉及蝇蛹深加工领域，具体涉及一种酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的工艺。

背景技术

与其他抗氧化剂相比，抗氧化肽不仅具有清除自由基或者抑制生物大分子过氧化的功能，还容易被机体吸收，提供营养，有助于修复氧化损伤。目前，抗氧化肽的来源主要有两个方面，包括天然存在提取分离而得以及酶解制备而得，而酶解法制备抗氧化肽是最为常见的一种方式。

家蝇幼虫，又称五谷虫、蝇蛆，是一种营养成分丰富的中药材。目前已经有多篇文献报道蝇蛆蛋白、蝇蛆酶解多肽均具有抗氧化活性，如赵春江等报道蝇蛆肽对衰老小鼠有抗氧化作用，可升高衰老小鼠血清、肝脏和脑组织中SOD、CAT的活性，降低MDA的含量；朱丽等报道对于H₂O₂诱导的HepG2细胞的氧化损伤，蝇蛆多肽具有保护作用。但是目前对于家蝇的抗氧化研究主要集中幼虫阶段，对于其他阶段的研究却几乎是空白。

卢红妍等利用碱性蛋白酶酶解松仁清蛋白制备抗氧化肽，并通过超滤、SephadexG-25、Sephadex G-15及反向高效液相色谱进行纯化，得到两条分子量分别为572.67Da和538.65Da的抗氧化肽；李娜等以鳕鱼鱼鳔为原料，对比了6种不同蛋白酶酶解液的抗氧化活性，筛选得到最佳蛋白酶为复合蛋白酶；巫春旭等以DPPH自由基清除率为评价指标，通过单因素和正交试验优化了碱性蛋白酶酶解蝇蛆蛋白制备抗氧化肽的工艺条件。

王土连,张晟,黄绮薇,等.家蝇蝇蛆耐高温抗氧化多肽的筛选及性质分析[J].广东农业科学,2015,42(21):145-149.将家蝇(Musca domestica)蝇蛆进行不同高温的水浴处理,测量蝇蛆抗氧化性的变化.结果显示,50℃处理抗氧化活力变化不显著,80、100℃处理短时间内出现显著下降,但残留的抗氧化活力在随后的高温中保持稳定,提示家蝇蝇蛆存在耐高温抗氧化物质.将蝇蛆提取液在100℃处理不同时间以筛选耐高温抗氧化物质,结果表明,经100℃处理5min筛选到的抗氧化物质在50、80、100℃保温5h,甚至在120℃超高温条件下保温30min,其抗氧化活力均保持稳定.SDS-PAGE电泳结合三氯乙酸沉淀反应结果证明,该物质为分子量约为30ku的多肽。

蝇蛹是蝇幼虫变化到成虫的一种过渡形态，幼虫和蛹的蛋白种类及含含量存在较大差异，而每种蛋白酶都有各自独特的酶切位点，所以家蝇幼虫和蛹的抗氧化肽的酶解制备方案不可简单转用。一般认为蝇蛹蛋白的抗氧化活性较弱，而经过变性处理后的蝇蛹蛋白，原有的抗氧化活性成分基本不再保持其原有活性。现有技术中未见通过酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的报导。

发明内容

本发明的目的在于提供一种酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的工艺。

本发明所采取的技术方案是：

一种酶解蝇蛹制备抗氧化活性多肽的工艺，包括如下步骤：

1)将蝇蛹洗净、粉碎、脱脂得到蝇蛹粉；

2)将蝇蛹粉和水混合，之后加热至蛋白变性，得到蝇蛹粉混悬液；

3)将蝇蛹粉混悬液冷却至酶解温度，加入蛋白酶，调节pH至适合酶解，酶解完成后，将酶灭活，固液分离，取上清干燥得到多肽。

在一些实例中，将蝇蛹粉和水混合浸提至少3次，每次至少30min。

在一些实例中，蛋白酶的添加量为6000～8000U/g蝇蛹粉。

在一些实例中，蝇蛹粉和水的质量混合比为：1：(10～30)。