[发明专利]一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法

权利要求书

1.一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)原料预处理

选择成熟干燥的桦褐孔菌，清水冲洗表面杂质后在45℃干燥至含水量为2-5％，粉碎成桦褐孔菌粉末；

(2)原料浸泡

按桦褐孔菌粉末质量与提取溶剂体积之比为1:2.5-3g/mL的比例加入提取溶剂，在45-50℃下浸泡材料0.5-1.5小时，制成样品；

(3)装柱

将步骤(2)中浸泡过的桦褐孔菌粉末与提取溶剂在室温下装入层析柱中，按照常规方法洗脱出桦褐孔菌三萜；

(4)循环柱层析提取

采用至少三根层析柱依次连续洗脱，上一根层吸柱的洗脱液直接进入下一根层吸柱进行洗脱，直至完成提取；

(5)大孔树脂预处理

依次用95％酒精、盐酸和NaOH溶液分别浸泡XAD-2大孔树脂12小时，然后往层析柱中装入XAD-2大孔树脂，然后以1.5BV/小时的流速用蒸馏水充分洗涤5BV，制成大孔树脂层析柱；

(6)大孔树脂层析柱层析纯化

使用时先将提取液以1.5BV/小时的流速加入预处理或再生后的大孔树脂层析柱，加样品于大孔树脂层析柱中，加样时柱大孔树脂柱内不得产生气泡、断层；

(7)蒸馏水除杂

待样品完全流入柱内后，用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤树脂柱3BV，洗去大部分杂质，不损失三萜；

(8)洗脱

用3BV的体积分数为80％的乙醇溶液从大孔树脂层析柱中洗脱三萜，收集洗脱液，洗脱过程中，三萜以暗黄色条带向下移动，可作为层析洗脱时的目测指标，收集三萜洗脱液；

(9)静置除杂

将收集好的三萜洗脱液密封，避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀；

(10)减压浓缩

取步骤(9)滤液或离心的上清液，在40-45℃条件下减压浓缩至除去乙醇；

(11)干燥

取步骤(10)减压浓缩后的浓缩液真空冷冻干燥12小时得亮黄色粉末，即为桦褐孔菌三萜。

2.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(1)中桦褐孔菌粉末的细度为40目。

3.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(2)中提取溶剂为质量百分数为40-60％的异丙醇水溶液。

4.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(3)中层析柱为XAD-2大孔树脂柱，层析柱洗脱时柱中材料的高度应为柱直径的5倍，洗脱流速为1BV/小时。

5.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(5)中盐酸和NaOH溶液的浓度为0.1moL/L。

6.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(5)中析柱中装入XAD-2大孔树脂的高度为层析柱直径的10～15倍。

7.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(6)中样品的体积不超过大孔树脂层析柱体积的4.5倍量。

8.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(8)中的洗脱流速为1BV/小时。

9.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(9)中避光在低温冷藏箱的温度为4℃。

10.根据权利要求1所述的提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，其特征在于所述步骤(11)中取步骤(10)减压浓缩后的浓缩液先在-20℃预冷2小时后再经-80℃真空冷冻干燥。