[发明专利]一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法

说明书

本发明属于桦褐孔菌三萜制备方法技术领域，具体涉及一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法。本发明提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，包括有提取、分离、精制和干燥四个步骤，其中提取步骤采用循环柱层析提取法，分离步骤采用大孔树脂吸附法，精制步骤采用沉淀法，干燥步骤采用喷雾干燥或超低温冷冻干燥法，极大地提高了桦褐孔菌三萜的提取率。

技术领域

本发明属于桦褐孔菌三萜制备方法技术领域，具体涉及一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法。

背景技术

桦褐孔菌(Inonotus obliquus)是一种珍贵的药用真菌,属于多孔菌科,褐卧孔菌属,分布于我国东北地区、芬兰、波兰、俄罗斯及日本等地。桦褐孔菌在民间常用来治疗肝癌、子宫癌、胃癌、高血压和糖尿病等疾病。三萜是桦褐孔菌中非常重要的一类化学成分,具有非常重要的生物活性。但是目前在提纯时由于存在溶剂浸润困难，耗时较长，提纯的效率很低。为了进一步提高提纯的效率、成本，以及提纯的质量，满足工业提纯的目的，急需一种有效的提纯方法。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提高一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法。

本发明的技术方案为：

一种提取纯化桦褐孔菌三萜的方法，包括以下步骤：

(1)原料预处理

选择成熟干燥的桦褐孔菌，清水冲洗表面杂质后在45℃干燥至含水量为2-5％，粉碎成桦褐孔菌粉末；

(2)原料浸泡

按桦褐孔菌粉末质量与提取溶剂体积之比为1:2.5-3g/mL的比例加入提取溶剂，在45-50℃下浸泡材料0.5-1.5小时，制成样品；

(3)装柱

将步骤(2)中浸泡过的桦褐孔菌粉末与提取溶剂在室温下装入层析柱中，按照常规方法洗脱出桦褐孔菌三萜；

(4)循环柱层析提取

采用至少三根层析柱依次连续洗脱，上一根层吸柱的洗脱液直接进入下一根层吸柱进行洗脱，直至完成提取；

(5)大孔树脂预处理

依次用95％酒精、盐酸和NaOH溶液分别浸泡XAD-2大孔树脂12小时，然后往层析柱中装入XAD-2大孔树脂，然后以1.5BV/小时的流速用蒸馏水充分洗涤5BV，制成大孔树脂层析柱；

(6)大孔树脂层析柱层析纯化

使用时先将提取液以1.5BV/小时的流速加入预处理或再生后的大孔树脂层析柱，加样品于大孔树脂层析柱中，加样时柱大孔树脂柱内不得产生气泡、断层；

(7)蒸馏水除杂

待样品完全流入柱内后，用蒸馏水以2BV/小时流速洗涤树脂柱3BV，洗去大部分杂质，不损失三萜；

(8)洗脱

用3BV的体积分数为80％的乙醇溶液从大孔树脂层析柱中洗脱三萜，收集洗脱液，洗脱过程中，三萜以暗黄色条带向下移动，可作为层析洗脱时的目测指标，收集三萜洗脱液；

(9)静置除杂

将收集好的三萜洗脱液密封，避光在低温冷藏箱中放置12小时后减压过滤或离心过滤除去沉淀；

(10)减压浓缩

取步骤(9)滤液或离心的上清液，在40-45℃条件下减压浓缩至除去乙醇；

(11)干燥

取步骤(10)减压浓缩后的浓缩液真空冷冻干燥12小时得亮黄色粉末，即为桦褐孔菌三萜。