[发明专利]一种N-乙酰神经氨酸的特异性生物传感器及其应用

权利要求书

1.一种生物传感器，其特征在于，含有启动子P_rapH、P_hbs，NanR基因、NanR基因结合位点和编码标记物的基因；所述启动子P_rapH、P_hbs、NanR基因和NanR基因结合位点位于同一载体上，构成所述生物传感器；所述P_rapH调控NanR的表达；所述P_hbs上整合调控NanR基因结合位点的序列，并调控编码标记物的基因表达；所述启动子P_rapH和启动子P_hbs转录方向相反；编码所述启动子P_rapH的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；编码所述启动子P_hbs的核苷酸序列如SEQID NO.2所示；编码所述NanR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；所述NanR基因结合位点的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的生物传感器，其特征在于，所述载体包括pHT系列质粒。

3.根据权利要求1或2所述的生物传感器，其特征在于，所述标记物为荧光蛋白。

4.含有权利要求1~3任一所述生物传感器的基因工程菌。

5.一种积累N-乙酰神经氨酸的重组枯草芽孢杆菌，其特征在于，含有权利要求1~3任一所述的生物传感器，并表达念珠藻来源的N-乙酰氨基葡萄糖异构酶和大肠杆菌来源的N-乙酰神经氨酸合酶。

6.一种构建权利要求1~3任一所述生物传感器的方法，其特征在于，将编码如SEQ IDNO.3所示NanR基因的核苷酸序列、如SEQ ID NO.1所示的编码启动子P_rapH的核苷酸序列和编码如SEQ ID NO.2所示启动子P_hbs的核苷酸序列依次连接在载体pHT01上。

7.一种筛选产N-乙酰神经氨酸菌株的方法，其特征在于，以荧光蛋白为标记物，将SEQID NO.5所示的N-乙酰氨基葡萄糖异构酶编码基因和SEQ ID NO.6所示的N-乙酰神经氨酸合酶编码基因构建到质粒pSTOP 1622中，转化至含有权利要求1~3任一所述生物传感器的枯草芽孢杆菌中，培养菌体细胞，检测荧光蛋白表达量，表达量高的菌株即为目的菌株。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述培养是在35-38 ^oC、180-220 rpm下培养10 -20h后，以10%-20%的接种量转接至发酵培养基，于35-38 ^oC、180-220 rpm条件下发酵30-50 h。

9.权利要求1~3任一所述的生物传感器在筛选产N-乙酰神经氨酸的枯草芽孢杆菌中的应用。