[发明专利]一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法

权利要求书

1.一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述生产制备方法包括以下工艺步骤：

（1）组分沉淀的悬浮

将冰冻的组份II+III沉淀从冷库取出，切成碎块，然后按一定的质量投料比（组份：缓冲液），投入预先配制的悬浮缓冲液中，并按每kg组份加入0.17kg甘氨酸的比例加入甘氨酸，均匀搅拌4-18小时，使沉淀充分悬浮分散；

（2）乙醇沉淀

将步骤（1）得到的悬浮液pH调节到4.95-5.45，然后按11%-17%的体积比加入乙醇溶液，料液温度控制在-5~1℃，搅拌2-6小时，使杂质蛋白充分溶出，得到均匀的悬浮液；

（3）离心或压滤

将步骤（2）得到的悬浮液pH调节到4.95-5.65，在-5~0℃下离心或压滤；收集上清液，即为粗纯的IgG溶液；

（4）阴离子交换柱层析

将步骤（3）得到的粗纯IgG溶液经深层滤器加0.45um滤芯过滤后，上阴离子交换柱，控制上样液的线流速不高于100cm/h，柱子预先用平衡缓冲液平衡；上柱过程中，收集流穿液，上柱结束后，用平衡缓冲液冲洗柱子，将冲洗液并入流穿液中；

（5）超滤浓缩及调节

将步骤（4）得到的流穿液用截留分子量30K的超滤膜浓缩，然后用透析液恒体积透析6-10倍，然后浓缩至蛋白浓度6-7%(w/v)左右，转移出超滤膜包并用透析液后洗膜包，再用透析液调蛋白浓度至5.35-5.45%(w/v)；

（6）低PH孵化

往步骤（5）得到的蛋白溶液中加入5%的山梨醇(w/w)，并调节pH到4.10-4.20，用0.22微米的除菌滤芯过滤后置于室温孵化21天；

（7）纳米膜除病毒过滤

用20纳米的滤芯过滤步骤（6）孵化结束的蛋白溶液以去除病毒；

（8）除菌过滤并分装。

2.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（1）中悬浮缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液或醋酸-磷酸二氢钠缓冲液的一种或几种，浓度为10-20mmol/L，ph值为3.95-5.25。

3.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（1）中搅拌时间为4-18小时；质量投料比为1：6-1：19。

4.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（2）中悬浮液pH调节到4.95-5.45；向悬浮液中加入乙醇的体积比为11%-17%；悬浮液温度为-5~1℃；搅拌时间为2-6小时。

5.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（3）中悬浮液pH调节到4.95-5.65。

6.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（4）中阴离子交换层析介质为Fractogel® EMD TMAE、Fractogel® EMD DEAE、Fractogel® EMD DMAE中的一种或几种；上样液的线流速为60-100cm/h。

7.根据权利1所述的一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，其特征在于，所述步骤（5）中恒体积透析体积倍数为6-10倍。