[发明专利]一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法

说明书

本发明公开了一种以人血浆组份II+III为起始原料，以低温乙醇沉淀结合离子交换柱层析生产制备静注人免疫球蛋白（IVIG）的方法。本发明中层析上样前料液不需要透析脱醇脱盐，也无需调节上样料液电导值，大大简化了工艺流程，使整个工艺具有流程简洁，生产周期短，纯度高的优点。通过本方法生产的IVIG产品所含的IgA和IgM较传统工艺大幅下降，PKA、ACA、抗A抗B血凝素及多聚体比均符合药典规定。

技术领域

本发明属生物制药领域。涉及一种从人血浆蛋白组分II+III中纯化免疫球蛋白的方法。

背景技术

静脉注射人免疫球蛋白（IVIG）是由健康人血浆经低温乙醇蛋白分离法提取制备的免疫球蛋白组分，经深加工和病毒灭活等步骤精制而成。IVIG具有免疫替代和免疫调节的双重治疗作用，临床使用广泛。IVIG最初多用于治疗多种原发性免疫球蛋白缺陷症和各种继发性免疫缺乏症如免疫介导的血小板减少、川崎病等。目前，已将IVIG的临床应用拓展到50多种疾病如再生障碍性贫血贫血、新生儿溶血病、输血后紫癜、特发性血小板减少性紫癜、癫痫、重症肌无力、多发性硬化症、多发性骨髓瘤、多发性肌炎、多发性神经病，脏器肿大，艾滋病等，在危重症的抢救中起着越来越重要的作用。

传统的生产工艺大都采用多步低温乙醇沉淀法，如专利CN104479011A,将I+II+III溶解后，先经两步低温乙醇（15%，V/V）沉淀，压滤除去大部分杂蛋白，然后将上清液（组分II）在中性条件下加乙醇(20%,V/V)沉淀出来，将沉淀复溶，经过超滤、透析、浓缩,再加乙醇(2%,V/V)沉淀一次，压滤收集上清液，再次超滤透析、浓缩加入保护剂后无菌分装。有少数采用低温乙醇沉淀结合柱层析法，如专利CN103554253A，以组分II+III为起始原料，溶解后加乙醇（18%，V/V）沉淀，压滤收集上清液，然后透析脱醇、脱盐，经过两步柱层析，收集流穿液，再次超滤、透析、浓缩，除菌过滤后孵化，后除病毒过滤再无菌分装得成品。

由于传统的低温乙醇结合柱层析法，料液在通过层析柱之前，需要透析脱醇脱盐，使得流程复杂，得率下降。

发明内容

本发明涉及一种改良的纯化方法，可以以人粗制血浆或粗制血浆蛋白组分为原料生产免疫球蛋白产品。

本方法具有下述主要技术特点：通过低温乙醇沉淀法去除聚集体和颗粒；料液不经过透析脱醇脱盐，在含有乙醇的条件下通过离子交换层析达到进一步纯化；包含低pH孵放和20纳米过滤两步除病毒步骤；所得免疫球蛋白产品纯度≥98%、IgG单体+二聚体≥96%、IgA含量≤3mg/L、IgM含量≤40mg/L、PKA<35IU/ml、ACA<50%、抗A、抗B血凝素<1:64。

与以前本领域的方法相比，由于料液可以在不去除乙醇的条件下直接进行层析纯化，大大简化了工艺流程，使整个工艺具有流程简洁，生产周期短，纯度高的优点。通过本方法生产的IVIG产品所含的IgA和IgM较传统工艺大幅下降，PKA、ACA、抗A、抗B血凝素及多聚体比均符合药典规定。

一种利用人血浆组份II+III生产制备IVIG的方法，包括如下步骤：

（1）组分沉淀的悬浮

将冰冻的组份II+III沉淀从冷库取出，切成碎块，然后按一定的质量投料比（组份：缓冲液），投入预先配制的悬浮缓冲液中，并按每kg组份加入0.17kg甘氨酸的比例加入甘氨酸，均匀搅拌4-18小时，使沉淀充分悬浮分散；

（2）乙醇沉淀

将步骤（1）得到的悬浮液pH调节到4.95-5.45，然后按11%-17%的体积比加入乙醇溶液，料液温度控制在-5~1℃，搅拌2-6小时，使杂质蛋白充分溶出，得到均匀的悬浮液；

（3）压滤

将步骤（2）得到的悬浮液pH调节到4.95-5.65，在-5~0℃下压滤；收集滤液，即为粗纯的IgG溶液；