[发明专利]一种增强产甘油假丝酵母2-苯乙醇耐受性的方法在审
| 申请号： | 201910384299.8 | 申请日： | 2019-05-09 |
| 公开（公告）号： | CN110079468A | 公开（公告）日： | 2019-08-02 |
| 发明（设计）人： | 张忠源;诸葛斌;王玉芹;宗红;陆信曜 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N1/19 | 分类号： | C12N1/19;C12N15/81;C12P7/22;C12R1/72 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 彭素琴 |
| 地址： | 214000 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 苯乙醇 产甘油假丝酵母 重组菌株 耐受性 体干 基因工程技术 发酵培养基 还原酶基因 合成途径 外界环境 固醇 菌株 空载 生长 | ||
1.一种产甘油假丝酵母工程菌，其特征在于，是以pGAPa为载体，在产甘油假丝酵母中过表达了C-24(28)还原酶基因，所述C-24(28)还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
2.如权利要求1所述的产甘油假丝酵母工程菌，其特征在于，以产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)CCTCC M 93018为宿主。
3.如权利要求1或2所述的产甘油假丝酵母工程菌，其特征在于，编码所述C-24(28)还原酶基因erg4的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.一种构建权利要求1-3任一所述的产甘油假丝酵母工程菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)以产甘油假丝酵母基因组为模板，PCR扩增erg4基因；
(2)将erg4基因插入到产甘油假丝酵母过表达重组质粒pGAPa的GAP强启动子和AOXI终止子之间，获得过表达整合载体pGAPa-erg4；
(3)将pGAPa-erg4转化至产甘油假丝酵母中。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述转化是通过醋酸锂转化法进行的。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，PCR扩增的上游引物erg4 F核苷酸序列如SEQID NO.2所示，下游引物erg4 R核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
7.一种增强产甘油假丝酵母2-苯乙醇耐受性的方法，其特征在于，是以pGAPa为载体，在产甘油假丝酵母中过表达了C-24(28)还原酶基因，所述C-24(28)还原酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示。
8.一种发酵权利要求1-3任一所述的产甘油假丝酵母工程菌的方法，其特征在于，是将权利要求1-3任一所述的产甘油假丝酵母工程菌的液态种子按1-5％(v/v)的接种量接入发酵培养基中，发酵温度为28-30℃，转速为200-220rpm，发酵时间为60-80h。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，挑取产甘油假丝酵母工程菌接入种子培养基中，在28-30℃，200-220rpm条件下，振荡培养12-20h，得到液态种子。
10.权利要求1-3任一所述的产甘油假丝酵母工程菌在制备食品、化妆品或香精中的应用。
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