[发明专利]基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法及其应用

权利要求书

1.基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

1)通过溴化氰对6B琼脂糖微球活化，得到活化后的琼脂糖微球；

2)将活化后的琼脂糖微球与对氨基化合物进行偶联反应，得到氨基修饰的琼脂糖微球；

3)将氨基修饰的琼脂糖微球与能特异性结合亲和素的氨基生物素在偶联剂作用下偶联反应；

4)步骤3)反应结束后，加入PBS溶液冲洗，即得纯化亲和素介质。

2.如权利要求1所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述步骤1)6B琼脂糖微球活化过程中，溴化氰与6B琼脂糖微球的质量比为0.01～1:1，反应温度为20～37℃，反应时间为30～120min。

3.如权利要求1或2所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述溴化氰与6B琼脂糖微球在0.1～1mol/L的碳酸钠缓冲液中进行混合。

4.如权利要求1所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述步骤2)偶联反应中，活化后的琼脂糖微球与对氨基化合物的质量比为1：0.05～1，反应温度为20～60℃，反应时间为30～120min。

5.如权利要求1或4所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述对氨基化合物为尿素、乙二胺、丁二胺、戊二胺、己二胺、辛二胺、二氨基癸烷或二氨基十二烷。

6.如权利要求5所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述步骤2)偶联反应的对氨基化合物溶于PBS缓冲液中。

7.如权利要求1所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的制备方法，其特征在于：所述步骤3)中氨基生物素为二亚氨基生物素，偶联剂为1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺，且二亚氨基生物素、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺和氨基修饰的琼脂糖微球的质量比为0.1～5:0.2～4:1～20，反应温度为20～37℃，反应时间为1～4h。

8.如权利要求1～7任一项制得的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的应用，其特征在于：将制得的纯化亲和素介质与粗提的鸡蛋清蛋白上清溶液混合，然后在pH为1.0～4.0的酸性环境中对纯化亲和素介质进行洗脱，收集洗脱液并中和至中性。

9.如权利要求8所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的应用，其特征在于：所述粗提的鸡蛋清蛋白上清溶液的制备过程：首先，采用 pH=7.0的PBS溶液与鸡蛋清充分混匀；然后将混匀的鸡蛋清溶液调整PH值至5.0在4℃条件下静置过夜，第二天收集其上清液；最后，采用饱和的硫酸铵对收集的上清液进行蛋白沉淀，将浑浊的蛋白母液进行离心，收集白色沉淀，用PBS溶液溶解沉淀，即得到粗提的鸡蛋清蛋白上清溶液。

10.如权利要求8所述的基于6B琼脂糖微球的纯化亲和素介质的应用，其特征在于：采用pH=7.4的PBS溶液冲洗洗脱后的纯化亲和素介质，并采用浓度为20%的乙醇溶液4℃避光保存经冲洗后的纯化亲和素介质。