[发明专利]一种抗氧化肽的制备方法

说明书

本发明提供一种抗氧化肽的制备方法，属于生物技术领域，包括以下步骤：1)将西番莲果肉与水水磨后加入复合蛋白酶与酶解助剂酶解，灭酶得酶解液；2)将酶解液固液分离，取液相超滤，小于2kDa的滤液低温浓缩得浓缩提取物；3)以水复溶浓缩提取物，所得肽溶液以凝胶层析柱分离纯化，收集洗脱组分的第二峰，液质联用色谱分离鉴定，得到西番莲抗氧化肽粗品；4)西番莲抗氧化肽粗品经二次纯化即得抗氧化肽纯品。有益效果为：本制备方法可缩短50～80％的酶解时间，显著降低酶解成本与能量消耗，抗氧化肽纯品中西番莲抗氧化肽的纯度较高，其对DPPH自由基和羟自由基的清除率可达90％以上，具有较高的经济价值。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种抗氧化肽的制备方法。

背景技术

西番莲(Passiflora caerulea L.)，为多年生常绿攀缘木质藤本植物，是一种芳香可口的水果，有“果汁之王”的美誉。又名百香果、受难果、巴西果、藤桃、热情果、转心莲、西洋鞠，转枝莲、洋酸茄花、时计草。西番莲茎圆柱形并微有棱角，无毛；叶纸质，基部心形，掌状5深裂，中间裂片卵状长圆形，两侧裂片略小，无毛、全缘；聚伞花序退化仅存1花，与卷须对生，花大，淡绿色；浆果卵圆球形至近圆球形，熟时橙黄色或黄色；种子多数，倒心形，长约5mm。花期5～7月。

据专家分析测试，西番莲果内含有丰富的蛋白质、脂肪、还原糖、多种维生素和磷、钙、铁、钾等多达165种化合物以及人体必需的17种氨基酸，营养价值很高，其中维生素含量1345(1·U/100G)，是抗癌的有效成份，菸酸含量1.7mm/100g，对于防止心血管疾病有积极的作用。西番莲果实成熟后气味芬芳，如切开则香气四溢、沁人肺腑，且果内有大量果瓤和果汁，食之甜酸可口，生津止渴，提神醒脑，特别适宜加工成果汁、果露、果酱、果冻等风味独特、营养丰富、滋补健身、有助消化的产品。西双版纳生产的西番莲果汁饮料已畅销国内外。西番莲的种子含油量高达21.7～25.25％，油质可与葵花油相媲美，是优质的食用油。西番莲的根、茎、叶均可入药，有消炎止痛、活血强身、降脂、降压的疗效。此外，西番莲果皮还是很好的饲料。然而有些西番莲果因品种原因往往较为酸涩，不宜使用，将其开发并提取营养物质或活性物质是对该类品种西番莲果的更深层次的加工，可大大提升西番莲果的应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗氧化肽的制备方法，本制备方法可通过作用于蛋白酶活性中心缩短50～80％的酶解时间，显著降低酶解成本与能量消耗，抗氧化肽纯品中西番莲抗氧化肽的纯度较高，其对DPPH自由基和羟自由基的清除率可达90％以上，具有较高的经济价值。

本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：

一种抗氧化肽的制备方法，具体包括以下步骤：

1)将西番莲果肉与水混合，水磨磨细后加入复合蛋白酶与酶解助剂酶解，灭酶得酶解液；西番莲果肉与水混合并磨细后有助于剥离开果肉中富含的纤维素，使蛋白质暴露出来，然后以复合蛋白酶与酶解助剂进行酶解蛋白质，复合蛋白酶中的多种蛋白酶具有相互增益的作用，其联合使用的酶解效率和酶解速度远远大于单一多种蛋白酶分别酶解之和，酶解助剂有利于激活蛋白酶的活性中性，活化蛋白酶，提高酶解效率；

2)将步骤1)中的酶解液中的固液分离，取液相超滤，将小于2kDa的滤液低温浓缩得浓缩提取物；将酶解液固液分离可祛除酶解液中的纤维素、木质素等杂质，超滤后即可得到分子量小于2kDa的富含抗氧化肽的滤液，便于后续分离纯化的进行；

3)以水复溶步骤2)的浓缩提取物，所得肽溶液以凝胶层析柱分离纯化，收集洗脱组分的第二峰，液质联用色谱分离鉴定，得到西番莲抗氧化肽粗品；肽浓缩提取物粗品复溶后以凝胶层析柱分离纯化可大大提高粗品中西番莲抗氧化肽的含量，凝胶层析柱分离纯化也可避免氧化肽的流逝，提高终产物中有效抗氧化肽成分的纯度和含量；