[发明专利]枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法

权利要求书

1.枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是包括以下步骤：

1)、制备孢子浓度为10⁷～10⁸CFU/ml的枯草芽孢杆菌培养液；

2)、配制营养液：

100ml营养液由(2.3±0.1)g Na₂HPO₄、(0.4±0.04)g无水柠檬酸和作用余量的水组成；

3)、除杂后紫花苜蓿草叶子晾晒、粉碎后，得苜蓿草叶粉；

4)、将苜蓿草叶粉按照1g/29～31ml的料液比加入至营养液中密封后灭菌，得苜蓿草液；

5)、接菌：

于无菌条件下，按照0.5～4％体积比的接种量，将枯草芽孢杆菌培养液接入至苜蓿草液，置于(30±1)℃摇床中发酵培养24～36h；

6)、处理：

将步骤5)所得的发酵液灭菌后离心；

离心所得的上清液抽滤，所得的滤液加入无水乙醇后静置、离心，所得的沉淀冷冻干燥，得苜蓿水溶性膳食纤维。

2.根据权利要求1所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：枯草芽孢杆菌为中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)编号1.14985的枯草芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：除杂后紫花苜蓿草叶子晾晒至水分含量≤10％，然后粉碎过60目筛，得苜蓿草叶粉。

4.根据权利要求1～3任一所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：所述步骤5)中摇床的震荡频率150±30r/min。

5.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：

所述步骤6)中，灭菌为121℃灭菌20min；

在所得的滤液加入(4±0.5)体积倍的无水乙醇；

离心转速(3500±500)r/min，(4±1)min；

所述冷冻干燥为(-50±10)℃的冷冻温度下干燥(24±2)h。

6.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：

称取90g营养肉汤培养基)，加入蒸馏水500ml，搅拌至营养肉汤培养基完全溶解，灭菌，得液体培养基；

于无菌环境中，用移液枪吸取0.1ml菌体甘油液，加至装有100ml液体培养基的250ml锥形瓶中，30℃摇床中以震荡频率130r/min培养直至得到孢子浓度为10⁷～10⁸CFU/ml的枯草芽孢杆菌培养液。

7.根据权利要求4所述的枯草芽孢杆菌发酵紫花苜蓿叶得水溶性膳食纤维的方法，其特征是：

所述步骤4)中的料液比为1g/30ml；

所述步骤5)中，接种量为1％体积比，发酵培养时间为24h。