[发明专利]一种同时检测GA I和II型尿液异常代谢化合物的方法

权利要求书

1.一种对尿液样本进行前处理的方法，包括下述步骤：

(1)尿素酶预处理：在尿液样本中加入尿素酶，然后进行孵育；

(2)将步骤(1)尿素酶处理后的尿液样本，加入内标十七烷酸及无水乙醇，充分混匀，离心，取上清液，用氮气吹干，残余物中加入双(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷，进行三甲基硅烷化衍生化处理，即得。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述尿素酶以尿素酶水溶液的形式加入，所述尿素酶水溶液的浓度为30～60 Units/30μl；所述尿液样本与所述尿素酶溶液的配比为100μl：30μl；所述孵育的条件为：37℃孵育20～45min。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述尿液样本任选下述一种：

1)新鲜尿液；

2)采集新鲜尿液，8小时以内分装到EP管，-20℃保存，处理前解冻使用；

3)用滤纸片浸透所述新鲜尿液，于干燥避光处阴干，将得到的干尿滤纸片密封后于-20℃保存；处理前将所述干尿滤纸片放入5ml注射器内，抽取1ml去离子水，室温静置5min，反复抽拉针筒，收集尿滤纸片浸出液；其中，所述滤纸为国产新华3号滤纸，规格5×8cm。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述尿液样本与无水乙醇的体积为100μl：1000μl；所述十七烷酸在所述尿液样本的浓度为200ppm；

所述离心的条件为：13000rpm离心5～10min；

所述双(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的体积比为99:1；

所述尿液样本的体积与双(三甲基硅基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷的体积之和的比为100μl：100μl。

5.一种采用GC-MS同时测定尿液中的戊二酸、乙基丙二酸、3羟基戊二酸、2羟基戊二酸、己二酸、辛二酸、癸二酸以及内源性肌酐的方法，包括下述步骤：

a)采用权利要求1-4中任一项所述的方法对尿液样本进行处理；

b)采用气相色谱-单四级杆质谱进行分析；

所述气相色谱-质谱的分析条件如下：

气相色谱柱为基于亚苯基硅烷固定相的非极性毛细管柱，规格：30m×0.25mmID×0.25μm；

进样量1μl；分流进样，其中分流比为20；进样口温度250℃；氦气流速1.0ml/min；恒流；柱温箱起始温度60℃，维持2min，以10℃/min的速度升温至220℃，维持3min；再以15℃/min的速度升温至325℃，维持5min；离子源温度280℃，传输线温度300℃，扫面范围50-550m/z，样本分析时间33min。

6.一种对尿液样本进行测定的系统在制备辅助诊断戊二酸尿症Ⅰ型或II型产品中的应用；

所述对尿液样本进行测定的系统包括采用权利要求5所述方法对尿液样本进行预处理和采用气相色谱-单四级杆质谱进行检测时所需的各种试剂和/或仪器。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述系统包括对尿液样本进行预处理的系统以及对预处理后的尿液样本采用气相色谱-单四级杆质谱进行检测的系统；

所述对尿液样本进行预处理的系统包括采用权利要求1-4中任一项所述方法对尿液样本进行预处理时所需的各种试剂和/或仪器；所试剂包括：尿素酶、十七烷酸、无水乙醇、双(三甲基硅基)三氟乙酰胺、三甲基氯硅烷；所述仪器包括：孵育设备、离心设备；

所述对预处理后的尿液样本采用气相色谱-单四级杆质谱进行检测的系统包括：气相色谱-质谱仪、氦气。