[发明专利]检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的引物对及方法

说明书

本发明公开了一种检测鸡毒支原体TS‑11疫苗株的引物对及方法，其中，该引物对包括：(上游)TGGGGTGAGATTGGTTAGG，(下游)CTATATCTTTTCTAGTGTAG；检测方法包括以下步骤：提取待测样品的DNA，以提取到的DNA为模板、以前述的引物对为引物进行PCR扩增反应，PCR扩增反应结束后对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳。本发明的有益之处在于：本发明根据鸡毒支原体TS‑11疫苗株序列的特点，设计了对鸡毒支原体TS‑11疫苗株具有特异扩增作用的PCR引物对，并已经对鸡毒支原体TS‑11疫苗、鸡毒支原体F疫苗、鸡毒支原体6/85疫苗、野毒R株与野毒S6株为供试材料进行了验证，只有鸡毒支原体TS‑11疫苗株的样品能特异性地扩增出一条620bp的电泳条带，这说明本发明设计的引物对具有很强的特异性和准确性。

技术领域

本发明涉及一种检测疫苗株的引物对及方法，具体涉及一种检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的引物对及方法，属于生物检测技术领域。

背景技术

鸡毒支原体(Mycoplasma Galliscepticum，MG)是对鸡群有明显致病性的支原体之一，在国内大型养殖集团集约化饲养中，鸡毒支原体的感染尤其严重。鸡毒支原体的传播方式有水平传播和垂直传播，一旦种鸡携带鸡毒支原体，将直接传给雏鸡，而一旦养殖场购进的雏鸡中带有少量经垂直传染的个体，育雏阶段很容易在全群迅速传播开来。因此，一个鸡场想要养好鸡，除了要有严格的防疫消毒制度、科学的饲养方法，更主要的是要保证有好的鸡种，鸡种不但要有优良的遗传性能，还要无传染病。因此，对种鸡的鸡毒支原体抗原检测尤为关键重要。

目前，国家要求原种鸡场对支原体、马立克、禽白血病等多种疾病尽快完成净化，近年来，随着疫苗使用技术的不管改进和种源禽白血病净化示范成功推广，禽流感、新城疫、传染性法氏囊病、马立可氏病及禽白血病均得到了有效控制，然而，我国鸡群中支原体感染的问题日益突出。虽然各养殖集团已经在生物安全隔离和其他多项控制措施上采取了多种防范，但国内疫苗免疫混乱，常用的MG疫苗就有TS-11、6/85、F株3种活苗，除此之外，还有另一种R型灭活苗，由于没有针对每一种疫苗株的精准检测，所以导致鸡场鸡毒支原体发病或者检测种鸡场是否携带鸡毒支原体病原，并区分是疫苗还是野毒感染时，很多检测机构和养殖集团内部的检测团队无从下手。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的引物对及方法，利用本发明提供的引物对和检测方法检测鸡毒支原体TS-11疫苗株准确性高、特异性强、灵敏度高、易于操作、快速且结果可靠。

为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

一种检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的引物对，其特征在于，该引物对包括：

上游引物：TGGGGTGAGATTGGTTAGG；

下游引物：CTATATCTTTTCTAGTGTAG。

一种检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的方法，其特征在于，包括以下步骤：

Step1：提取待测样品的DNA；

Step2：以Step1提取到的DNA为模板，以前述的引物对为引物，进行PCR扩增反应；

Step3：PCR扩增反应结束后，对PCR扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳；

Step4：观察电泳检测图，根据有无特异性扩增产物的目的条带出现来判定待测样品中是否含有鸡毒支原体TS-11疫苗株。

前述的检测鸡毒支原体TS-11疫苗株的方法，其特征在于，在Step1中，使用青岛英赛特生物科技有限公司研发的棉拭子DNA提取试剂盒来提取待测样品的DNA。