[发明专利]一种高通量检测8种疫霉菌的分子检测方法

权利要求书

1.一种高通量检测8种疫霉菌的分子检测方法，其特征在于：包括提取待检微生物的DNA，以提取的DNA为模板，利用8种疫霉菌 LAMP检测引物与96孔板相结合对待检微生物同时进行高通量检测；观察LAMP反应溶液颜色变化，天蓝色表示检测结果为阳性，存在目标疫霉菌；紫色表示检测结果为阴性，不存在目标疫霉菌；所述8种疫霉菌LAMP检测引物包括Phytophthora parasitica、Phytophthora tentaculata、Phytophthora infestans、Phytophthora fragariae、Phytophthora capsici、Phytophthora drechsleri、Phytophthora cactorum和Phytophthora megasperma的LAMP检测引物，每种疫霉菌的LAMP检测引物由正向内引物FIP、反向内引物BIP、正向外引物F3、反向外引物B3和正向环引物LF、反向环引物LB组成，各引物序列具体如下：

Phytophthora parasitica的引物包括：

F3：5'-CTTTGTAAGTGCCACCATAC-3'；

B3：5'-ACAGACACACACGTGATT-3'；

FIP：5'-TCGATCGTACGGATTTTCTGCAGAAAGATCCAGGTTTTCATCAGG-3'；

BIP：5'-AGACCATCAAGCTCCAGATTGTACGTGGTACATCGGTTAGTTGAA-3'；

LB：5'-GACTTGTATCACTGCAGTTT-3'；

Phytophthora tentaculata的引物包括：

F3：5'-TGCCTTATAGGAATAGCGC-3'；

B3：5'-AGCATAAGTGAATTGACCCA-3'；

FIP：5'-ATCGTACGGATTTTCTGAGCAAAGTAGATCCCGATTTCCATCAG-3'；

BIP：5'-TGGACGGCAAGACCATCAAGTCCGTTAGTTAAATAAATACCTCGA-3'；

LB：5'-CTCCAGATTGTACGTCCTTCGT-3'；

Phytophthora infestans的引物包括：

F3：5'-TGTGAGTGTCTAACATATTTTACG-3'；

B3：5'-GTTAGTTAAATAGGAAATCACGC-3'；

FIP：5'-AATCGCGAAAGCCATGTGAGCCAAACGACCTTTTGTAAGG-3'；

BIP：5'-TTGCTTAGAAAATCCGTACGATCGGACAAATGTTTTTTTAGCGGC-3'；

LB：5'-GGCAAGACCATCAAGCTCCAA-3'；

Phytophthora fragariae的引物包括：

F3：5'-TGAGTGCTAGTAACTAGCCT-3'；

B3：5'-ACCAGTTAGCTCCATGAAGC-3'；

FIP：5'-CTGTGCACAACAACGAGCACGAATTCCTAGGTCCAAAAAGGC-3'；

BIP：5'-AATTCGCACGATCGAGCTGGATTAGCCGGCGAAATGTTCC-3'；

LF：5'-CAGCAATCGGAGAGCAAATCTTA-3'；

LB：5'-CGGCAAGACTATCAAGCTCCAGA-3'；

Phytophthora capsici的引物包括：

F3：5'-CTCTGTTGTATAGCAGAGGT-3'；

B3：5'-GCACAAGACAATTAGCACAAT-3'；

FIP：5'-TTCTGGGCGCGTACACAAACTTAGTGAGGGACAATTTATATCAGG-3'；

BIP：5'-GATCGAGTTGGACGGCAAGATCCAGTGCTCTAACTAAAACG-3'；

LB：5'-CCATCAAGCTCCAGATTGTAAGC-3'；

Phytophthora drechsleri的引物包括：

F3：5'-GTGATCCTTTCACCCTGG-3'；

B3：5'-TTACAAATGTCAGCTGGATG-3'；

FIP：5'-CGGATTTTCTAGAACGTGGTACCAAAATGAAGAGTCGACTCTAGCA-3'；

BIP：5'-ACTATTGAGCTGGACGGCAATCGATAGCAGCCCAAGAG-3'；

LB：5'-TGTACGTCTACAGAGGATTTGGAT-3'；

Phytophthora cactorum的引物包括：

F3：5'-TTCTGCGCTAGGCGACC-3'；

B3：5'-CACACAAGTGGACCGTTAG-3'；

FIP：5'-TCTGGGCACAACCGCAAAAATTTGCGAGCTCCAGATTTCC-3'；

BIP：5'-AATCCGTACGATCGAGCTGGACACACGCCACGTCTGCT-3'；

LB：5'-GGAAAGACCATCAAGCTCCAGAT-3'；

Phytophthora megasperma的引物包括：

F3：5'-GCTCTGCTCTTCCGACTTG-3'；

B3：5'-GTTAGTTTCGTCCACGGCA-3'；

FIP：5'-CGGGCAAGAGCAACGTCAGTGTCCCATTGTGGTCCAGTAC-3'；

BIP：5'-TCCGTACGATCGAGCTGGACGAGAAGAAAGGAATGGAGGCC-3'；

LB：5'-GCAAGACCATCAAGCTCCAGATTG-3'。