[发明专利]一种单颗粒水平上的均相免疫分析方法

说明书

一种单颗粒水平上的均相免疫分析方法，包括，将捕获抗体和检测抗体分别修饰在金纳米颗粒CA‑AuNP和量子点DA‑QD上；将样品加入到CA‑AuNP和DA‑QD混合液中，震荡、孵育一段时间，形成CA‑AuNP‑抗原‑DA‑QD的夹心结构；取制备的溶液滴于载玻片上，将载玻片置于暗场显微镜下成像；照射载玻片一段时间，在照射过程中记录金颗粒的散射强度；夹心结构中的金颗粒与量子点发生等离子共振能量转移，导致金颗粒散射强度降低。没有形成夹心结构的CA‑AuNP散射强度与颗粒数目分布为正态分布，以该正态分布的期望值为基准值；统计低于和高于基准值的金颗粒数目，计算两者比例，以该比例定量抗原浓度。本方法为均相免疫分析，简单快捷，使用样品量少，在单颗粒水平上成像，检测限低、检测灵敏度高。

技术领域

本发明涉及生物化学和医学检测技术领域，具体涉及一种单颗粒水平上的均相免疫分析方法。

背景技术

免疫分析是生物化学和医学检测中使用最广泛的技术之一。它是利用抗原与抗体特异性结合来定性、定量抗原(可以是药物、激素、蛋白质、微生物等物质)或抗体的一种分析方法；一般以抗原抗体结合物或游离抗体含量为定量依据的检测技术。

免疫分析按照是否需要分离操作步骤可以分为两类，即非均相免疫分析和均相免疫分析。前者需要先将抗原抗体反应混合液的某组分分离后再对各组分检测，灵敏度高，检测限低；但其操作步骤多，过程复杂，费时、费力。后者无需分离抗原抗体反应混合液中各组分，一步完成，具有操作简单、时间短、易实现自动化等优点；但相对于非均相免疫分析，均相免疫分析法灵敏度较差。

最近几年文献中报道了一些均相免疫分析方法，包括共振能量转移法、动态散射法、共振散射相关光谱、磁弛豫、化学发光法等。这些方法的问题在于检测限不够低，复杂体系中可靠性不够高、样品使用量较大。因此，发展一种微量血液中高灵敏均相免疫分析方法具有十分重要的意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种单颗粒水平上的均相免疫分析方法，以夹心结构中的金颗粒与量子点发生等离子共振能量转移而导致的金颗粒散射强度降低为定量基础，快速、灵敏、准确检测血液中肿瘤标志物浓度。

为实现上述发明目的，本发明的技术方案具体如下：

一种单颗粒水平上的均相免疫分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将捕获抗体和检测抗体分别修饰在金纳米颗粒CA-AuNP和量子点DA-QD上；

S2：将样品加入到CA-AuNP和DA-QD混合液中，震荡、孵育一段时间，形成CA-AuNP-抗原-DA-QD的夹心结构；

S3：取S2制备的溶液滴于载玻片上，将载玻片置于暗场显微镜下成像；

S4：照射载玻片一段时间，在照射过程中记录金颗粒的散射强度；夹心结构中的金颗粒与量子点发生等离子共振能量转移，导致金颗粒散射强度降低，没有形成夹心结构的CA-AuNP散射强度与颗粒数目分布为正态分布，以该正态分布的期望值为基准值，统计步骤S4中低于和高于基准值的金颗粒数目，计算两者比例；

S5：将步骤S4中的低于基准值的金颗粒数量与高于基准值的金颗粒数量之比与抗原浓度关联。

进一步的，所述步骤S1中的金纳米颗粒包括金纳米球、金纳米棒、金纳米星和不规则的金纳米颗粒；所述步骤S2中的孵育时间为10～100分钟；所述步骤S3具体包括：取1.8微升S2制备的溶液滴于载玻片上，将载玻片置于暗场显微镜下成像；所述步骤S4中的照射时间为2～30分钟；所述步骤S5中关联为以步骤S4获得的比例为纵坐标，以抗原浓度的对数值为横坐标获得标准曲线或标准加入法。

本发明还提供了上述分析方法在简单溶液中前列腺特异性抗原PSA定量检测中的应用。

本发明还提供了上述分析方法在血清PSA定量检测中的应用。