[发明专利]一种牙龈干细胞的分离、培养方法及其应用

权利要求书

1.一种牙龈干细胞的分离、培养方法，其特征是，包括对牙龈组织进行消化处理，其中所述消化处理过程中消化牙龈组织的消化液为质量体积浓度小于0.3％的胶原酶-磷酸盐缓冲液。

2.如权利要求1所述的方法，其特征是，所述胶原酶-磷酸盐缓冲液为Ⅰ型胶原酶-磷酸盐缓冲液。

3.如权利要求2所述的方法，其特征是，所述消化液按照如下方法制备而成：将质量体积浓度为1％的Ⅰ型胶原酶储存液用磷酸盐缓冲液稀释至质量体积浓度小于0.3％，优选为0.2％-0.3％，进一步优选为0.25％)。

4.如权利要求1-3任一所述的方法，其特征是，所述消化处理时间为25-40min；消化处理温度低于37℃；优选为35-37℃。

5.一种牙龈干细胞的分离、培养方法，其特征是，包括如下顺序进行的步骤：

1)将拔牙手术取下的牙齿清洗后，刮取牙齿根部的牙龈组织，并对牙龈组织进行剪切处理，制成预处理牙龈组织；

2)将预处理的牙龈组织置于消化液中，进行牙龈组织的消化处理，获得牙龈组织消化混合液；

3)将牙龈组织消化混合液与完全培养基混合，终止消化反应，并对终止混合液进行离心处理；

4)向离心沉淀中加入重悬液，进行重悬，获得重悬混合液；接着将重悬混合液与完全培养基混合后，进行孵育处理，获得牙龈干细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其特征是，步骤2)中所述消化液为质量体积浓度小于0.3％的胶原酶-磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求6所述的方法，其特征是，步骤2)中所述胶原酶选择Ⅰ型胶原酶。

8.一种如权利要求1-7任一方法制备的牙龈干细胞在维持功能性滤过泡形态和功能中的应用。

9.一种如权利要求1-7任一方法制备的牙龈干细胞在制备药物或制剂中的应用，其特征是，所述药物或制剂为抑制青光眼术后功能性滤过泡消退的药物、制剂。

10.一种如权利要求1-7任一方法制备的牙龈干细胞在制备抗青术后滤过功能障碍的药物中的应用。