[发明专利]一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的制备：将单独制备的PdCu纳米线和多孔石墨烯结合；

（2）构建无标记型PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器，测定乙肝e抗原HBe Ag含量，绘制工作曲线。

2.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的制备具体如下：

① PdCu纳米线的制备

在室温下，分别取0.5 ~ 1.5 mL的20 mmol/L四氯钯酸钠溶液，0.5 ~ 1.5 mL的20mmol/L氯化铜溶液，0.03 ~ 0.1 mL的6 mmol/L盐酸溶液，30 ~ 90 mg溴化钾和20 ~ 60.0mg聚醚F127，将其溶于去离子水中，然后向溶液中加入0.5 ~ 1.5 mL的0.1 mmol/L抗坏血酸溶液，将其在90 ℃的油浴中保持30 min，自然冷却至室温，在转速10000 rpm离心收集得到PdCu纳米线的水分散系；

② 多孔石墨烯的制备

在连续超声下将0.33 ~ 1.0 g六水合三氯化铁与0.33 ~ 1.0 mL的5.0 mg/mL氧化石墨烯溶液混合1 h，然后，通过滤纸过滤混合物，将滤纸在60 ℃的真空烘箱中干燥，将带盖的滤纸放在锡箔上，用钳子放入马弗炉中，并在450 ℃下点火，然后，用钳子取出锡箔上的片材并自然冷却至室温，用超纯水离心10次直到上清液变为无色，将产物用乙醇洗涤之后，60 ℃下干燥过夜，用稀盐酸洗涤得到多孔石墨烯；

③ PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子的制备

向20.0 mg制备的多孔石墨烯加入5.0 ~ 15.0 mL、1.0 mg/mL的PdCu纳米线分散液，将混合物超声1 h，离心后的黑色沉淀物在室温下干燥，将20.0 mg黑色粉末再分散在5.0 mL、pH=7.4的缓冲溶液中。

3.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的构建电化学免疫传感器，具体如下：

（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；

（2）将6.0 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子的分散液滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；

（3）将6.0 µL、5 ~ 15 µg/mL的乙肝e抗体滴加到电极表面，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3.0 µL、1~ 2 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中晾干；

（5）继续滴加6.0 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙肝e抗原Hbe Ag溶液，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗，4.0 ℃冰箱中干燥，制得一种无标记型电化学免疫传感器。

4.根据权利要求1所述的一种检测乙肝e抗原HBe Ag的电化学免疫传感器及其制备方法，其特征在于：步骤(2)所述的测定乙肝e抗原HBe Ag，绘制工作曲线，具体如下：

① 在三电极体系下进行测试，以饱和甘汞电极为参比电极，以铂丝电极为对电极，以所制备的免疫传感器为工作电极，采用10 mL、50 mmol/L的pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液配制不同浓度的乙肝e抗原HBe Ag溶液，将6 µL不同浓度的乙肝e抗原HBe Ag溶液分别滴涂至电极表面，反应0.5 ~ 2 h，晾干后连接至电化学工作站中，分别将电极浸于pH=7.0的磷酸盐缓冲溶液中测定其氧化还原电流变化，当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、50mmol/L的pH=7.0磷酸盐缓冲溶液中注入10 µL、5 mol/L的过氧化氢溶液，记录电流变化；

② 根据所得电流差值与乙肝e抗原HBe Ag浓度呈线性关系，绘制工作曲线；

③ 利用工作曲线法，得到待测样品中乙肝e抗原HBe Ag的浓度。