[发明专利]一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法及应用

说明书

本发明属于免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法，PdCu纳米线功能化多孔石墨烯作为电化学信号发放大平台来构建无标记型电化学免疫传感器，实现了对乙肝e抗原的定量检测，具有特异性强，灵敏度高，检测限低等优点，对乙型肝炎的检测具有重要的科学意义和应用价值。

技术领域

本发明属于新型纳米复合材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的无标记型电化学免疫传感器的制备方法，应用于乙肝e抗原HBeAg的检测。

背景技术

目前，癌症是世界许多地区的主要公共卫生问题，癌症通常仅在全身转移后才被诊断出来，癌症不仅致命，而且是全球最昂贵的疾病之一，癌症晚期治愈率低，因此发展高灵敏的癌症致病因子的定量检测方法检测早期癌症具有重要意义。

乙型肝炎病毒感染是最受关注的健康问题之一，它可引发癌症死亡率第二名的肝癌，乙肝e抗原HBe Ag已被确定为乙肝病毒感染引起的疾病诊断和预后的可靠肿瘤标志物，因而，开发灵敏、快速、准确的乙肝e抗原HBe Ag检测，对于乙肝病毒的检测具有重要意义。

传统的免疫测定技术有耗费时间、准确度不高等缺点，因此具有小型化、便携式等特点电化学免疫传感器应运而生，电化学免疫传感器将免疫反应的特异性和换能器的灵敏性与便捷性结合在一起，给提高癌症诊断和治疗检测的水平带来了希望。

本发明以PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子作为电化学信号放大平台，实现了对乙肝e抗原HBe Ag的定量检测，具有检测下限低、灵敏度高、操作简单、检测速度快等优点，并且具有良好的重现性、稳定性和选择性，构建此电化学免疫传感器的研究对乙肝e抗原HBe Ag的检测具有十分重要的意义。

发明内容

本发明提供了一种无标记型PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法及应用，实现了对乙肝e抗原HBe Ag的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器用于乙肝e抗原HBe Ag的检测。

本发明的技术方案，包括以下步骤：

1. 一种PdCu纳米线功能化多孔石墨烯的电化学免疫传感器的制备方法，步骤如下：

（1）将直径为3.0 ~ 5.0 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉抛光成镜面，在无水乙醇中超声清洗干净；

（2）将6.0 µL、0.5 ~ 2.0 mg/mL的PdCu纳米线功能化多孔石墨烯纳米粒子的分散液滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；

（3）将6.0 µL、5 ~ 15 µg/mL的乙肝e抗体滴加到电极表面，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3.0 µL、1~ 2 mg/mL的牛血清蛋白溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗电极表面，4.0 ℃冰箱中晾干；

（5）继续滴加6.0 µL、0.1 pg/mL ~ 100 ng/mL的一系列不同浓度的乙肝e抗原HBe Ag溶液，用pH=7.0的磷酸盐缓冲液冲洗，4.0 ℃冰箱中干燥，制得一种无标记型电化学免疫传感器。

2. 一种基于铂钯功能化二硫化钼的无酶电化学免疫传感器的制备方法，所述相关材料的制备，步骤如下：

（1）PdCu纳米线的制备