[发明专利]高密度灌注培养重组CHO细胞生产人促卵泡激素的方法、培养基及其应用

权利要求书

1.一种高密度灌注培养重组CHO细胞生产人促卵泡激素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将CHO细胞复苏活化后，使用基础培养基进行培养获得种子悬液；

2)当种子培养液达到一定密度后，采用灌注培养基进行灌注培养；

灌注培养的方法：将新鲜生产培养基补加到生物反应器罐体内，反应器的外部连接中空纤维截留装置，通过对CHO细胞进行截留和反冲洗维持CHO细胞较高的密度和活力；使用所述的灌注培养基进行灌注和反冲洗；

3)当反应器内细胞密度及活力处于稳定状态时，开启CHO细胞表达产物收集,表达产物为人促卵泡激素；

其中，所述的灌注培养基为无血清、无蛋白以及化学成份明确的细胞培养基，所述的灌注培养基由基础培养基和补料培养基按照一定比例混合而成，相应的，所述基础培养基也为无血清、无蛋白以及化学成份明确的细胞培养基；

所述的无血清、无蛋白以及化学成份明确的灌注培养基是由90％的基础培养基与10％的补料培养基组成，具体成份如下：

1)所述基础培养基具体成份如下：400.45mg/ml的L-盐酸精氨酸，150.66mg/ml的L-精氨酸，130.89mg/ml的L-天冬酰胺，1498.68mg/ml的L-一水天冬酰胺，345.65mg/ml的L-天冬氨酸，300.12mg/ml的L-一水天冬氨酸钠盐，246.54mg/ml的L-半胱氨酸，345.45mg/ml的L-一水半胱氨酸盐酸盐，300.00mg/ml的L-2盐酸半胱氨酸，371.78mg/ml的L-谷氨酸，213.54mg/ml的L-一水谷氨酸钠，245.56mg/ml的L-谷氨酰胺，125.34mg/ml的甘氨酸，192.62mg/ml的L-组氨酸，300.12mg/ml的L-一水组氨酸盐酸，380.00mg/ml的L-异亮氨酸，460.43mg/ml的L-亮氨酸，556.76mg/ml的L-盐酸赖氨酸，234.54mg/ml的L-赖氨酸，235.57mg/ml的L-甲硫氨酸，294.11mg/ml的L-苯丙氨酸，308.61mg/ml的L-脯氨酸，435.65mg/ml的L-丝氨酸，332.45mg/ml的L-苏氨酸，207.12mg/ml的L-色氨酸，278.34mg/ml的L-2水酪氨酸钠，300.32mg/ml的L-缬氨酸，0.12mg/ml的生物素，65.67mg/ml的氯化胆碱，3.65mg/ml的氰钴胺，11.23mg/ml的叶酸，116.43mg/ml的肌醇，15.55mg/ml的烟酰胺，20.12mg/ml的D-戊二烯酸钙，19.65mg/ml的盐酸吡哆醇，1.55mg/ml的核黄素，13.43mg/ml的盐酸硫胺素，0.72mg/ml的DL-α-硫辛酸，0.00786mg/ml的偏钒酸铵，0.00653mg/ml的四水钼酸铵，0.0906mg/ml的五水硫酸铜，0.00186mg/ml的四水合氯化锰，0.00554mg/ml的一水硫酸锰，0.00120mg/ml的六水硫酸镍，0.00540mg/ml的溴化钾，0.00529mg/ml的偏钒酸钠，1.03mg/ml的九水偏硅酸钠，0.00101mg/ml的二水氯化亚锡，0.43mg/ml的七水硫酸亚铁，30.03mg/ml的氯化镁，50.75mg/ml的硫酸镁，341.75mg/ml的氯化钾，0.04mg/ml的硝酸钾，64.93mg/ml的一水磷酸二氢钠，34.56mg/ml的碳酸氢钠，75.6mg/ml的腐胺，113.91mg/ml的丙酮酸钠，6543.68mg/ml的葡萄糖，489.75mg/ml的磷酸氢二钠，0.04mg/ml的亚硒酸钠，5.58mg/ml的七水硫酸锌，3.67mg/ml的乙醇胺，103.82mg/ml的氯化钙，6.87mg/ml的柠檬酸铁，2065.43mg/ml的氯化钠，320mg/ml的富马酸二钠组成；

2)所述补料培养基具体成份如下：25mg/L的L-丙氨酸，2300mg/L的L-精氨酸，4600mg/L的L-天门冬氨酸，1350mg/L的L-半胱氨酸，7600mg/L的L-谷氨酸，36mg/L的甘氨酸，1250mg/L的L-一水盐酸组氨酸，280mg/L的L-脯氨酸，5650mg/L的L-亮氨酸，4600mg/L的L-盐酸赖氨酸，950mg/L的L-蛋氨酸，2500mg/L的L-苯丙氨酸，1600mg/L的L-脯氨酸，3500mg/L的L-丝氨酸，2800mg/L的L-苏氨酸，1600mg/L的L-色氨酸，2500mg/L的L-酪氨酸钠，3700mg/L的L-缬氨酸，14.5mg/L的维生素C，6.5mg/L的维生素H，2380mg/L的氯化胆碱，25mg/L的叶酸，260mg/L的肌醇，28mg/L的烟酰胺，6.5mg/L的盐酸吡哆醇，25.5mg/L的盐酸硫胺素，4.5mg/L的维生素B12，26.5mg/L的泛酸钙，40mg/L的磷酸氢二钠，450mg/L的磷酸二氢钠，0.038mg/L的硫酸铜，25.5mg/L的硫酸锌，0.000075mg/L的氯化锰，0.165mg/L的硅酸钠，0.0009mg/L的偏钒酸铵，0.00015mg/L的硫酸镍，0.0024mg/L的氯化铝，0.002mg/L的硝酸银，0.00013mg/L的氯化钡，00018mg/L的氯化钾，0.0042mg/L的溴化钠，0.00018mg/L的碘化钠，0.0014mg/L的氯化铷，0.004mg/L的氯化锆，0.00018mg/L的氯化铬，0.0035mg/L的氯化钴，0.0042mg/L的氟化钠，27.5mg/L的柠檬酸铁，950mg/L的F-68，18000mg/L的葡萄糖，3.5mg/L的DL-α-脂肪酸，275mg/L的丙酮酸钠，8.5mg/L的腺苷，8.5mg/L的尿苷，8.5mg/L的胞苷，8.5mg/L的鸟苷。