[发明专利]表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与应用

说明书

本发明公开了一种表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与应用。该重组火鸡疱疹病毒为在火鸡疱疹病毒(HVT)的编码序列的非必需复制区中的HVT‑065和HVT‑066基因之间插入外源基因表达盒；其中，外源基因表达盒由MCMV启动子、外源基因和SV40 poly A依次连接而成；所述的外源基因为H7HA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明还提供该重组火鸡疱疹病毒的构建方法，是利用超声裂解破碎的方法进行纯化，缩短筛选的时间，获得的重组火鸡疱疹病毒rHVT‑H7HA对高致病性H7N9亚型禽流感病毒提供良好的保护，可用于后续开发新型的禽流感病毒疫苗。

技术领域

本发明属于分子生物学和基因工程领域，特别涉及一种表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与应用。

背景技术

火鸡疱疹病毒(HVT)Fc-126株与马立克氏病病毒(MDV)具有抗原相关性，被广泛用作预防马立克氏病(MD)的活疫苗，该疫苗无致致病性，保护效果出色^[1]。相比其它病毒载体，HVT具有其独特的优势^[2-7]，如：HVT本身就是疫苗候选株，可以感染的宿主包括鸡和水禽，但不致病，庞大的基因组可为外源基因提供多个插入位点，具有成为多价疫苗的潜力；HVT为细胞结合性病毒，可克服母源抗体的影响，可同时诱导较强的细胞和体液免疫；HVT可在宿主体内终生繁殖，一次免疫可以使宿主持续免疫；HVT载体疫苗适合早期规模化免疫，节约成本，提高效率。

目前多家公司研制的的表达不同抗原的基于HVT载体的商品化疫苗已经上市^[8-10]，例如：-ND-SB(MSD Animal Health)、HVT-ILT(MSD AnimalHealth)、HVT-IBD(Merial)、HVT-AI(Ceva)、HVT-NDV(Ceva)、HVT-IBD(Ceva)。HVT载体的商品化疫苗在多个国家的家禽养殖业中投入使用，保护效果良好。哈尔滨兽医研究所开展了H5N1亚型禽流感病毒HVT载体疫苗的研究^[11]，扬州大学和中国农业大学开展了H9亚型禽流感病毒HVT载体疫苗的研究^[12,13]。

在第5波H7N9亚型禽流感病毒流行中，出现了对鸡具有高致病性H7N9亚型禽流感病毒，对养禽业造成重大经济损失^[14,15]；2016年10月至2017年6月，全国有752例人感染H7N9禽流感病毒。我国从2017年下半年开始在全国养殖场推广H5/H7禽用二价苗，人感染H7N9禽流感病毒病例迅速下降，该研究结果表明，病毒主要在家禽之间以及从家禽到人类传播，疫苗可以有效阻断病毒在家禽之间传播，从而减少病毒在家禽和人之间传播^[16]。因此，禽用禽流感疫苗不但可以促进养禽业发展而且可以降低H7N9流感病毒对公共卫生安全的威胁。

目前国内使用的禽用禽流感疫苗为全病毒灭活疫苗。全病毒灭活疫苗虽然可以保护家禽，降低禽流感爆发的风险，但是全病毒灭活疫苗自身的缺陷增加了禽流感防控的难度^[17,18]。首先，该类疫苗容易受母源抗体干扰，需要大剂量多次免疫，成本高。其次，不能准确区分野毒感染和疫苗免疫，为禽流感流行病学监控增加难度。而且，由于该类疫苗主要产生体液免疫，因此疫苗株与流行株要高度同源，否则免疫效果不理想。开发新型的禽流感病毒疫苗对防控禽流感具有重要的意义。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒。

本发明的另一目的在于提供一种表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建方法。

本发明的又一目的在于提供所述表达H7N9亚型高致病性禽流感病毒HA蛋白的重组火鸡疱疹病毒的应用。