[发明专利]一种一步式胚胎培养液

权利要求书

1.一种一步式胚胎培养液，其特征在于，包含：

a、对胚胎培养和发育起着重要作用的组合物

b、基本培养液

所述组合物，包括(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF。

2.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述组合物与基本培养液的体积比为0.1％-1％。

3.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述组合物中(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF的摩尔质量比为550.0-980.0：440.0-780.0：0.0138-0.0197：0.0006-0.0008：0.0003-0.0005：0.0002-0.0004：0.0000002-0.0000005。

4.根据权利要求1所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述基本培养液包括无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐、人血清白蛋白和杀菌剂。

5.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述无机盐缓冲液、氨基酸、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、N-乙酰-L-半胱氨酸、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐的摩尔比为98.303-120.12：1.2-3.8：0.009-0.012：9.459-11.561：24.741-30.239：0.432-0.528：0.9-1.1：0.207-0.254：0.702-0.858:8.125-10.239:8.125-10.239。

6.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述人血清白蛋白的含量为0.45-0.55g/L，杀菌剂的含量为5.0-20.0mg/L。

7.根据权利要求4所述的一步式胚胎培养液，其特征在于，所述杀菌剂为庆大霉素。

8.如权利要求1-7任一项权利所述的一步式胚胎培养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)在百级条件下配制，按上述比例依次将氯化钠、氯化钾、硫酸镁、氯化钙、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、碳酸氢钠、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸/4-羟乙基哌嗪乙磺酸HEPES、3-(N-吗啉基)丙磺酸钠盐MOPS-Na、乙二胺四乙酸、丙酮酸钠、丙氨酰谷氨酰胺、牛磺酸、葡萄糖、D-山梨醇、(±)-α-硫辛酸、乙酰L-肉碱或乙酰L-肉碱盐酸盐、氨基酸加到超纯水中，混合后得溶液I；

2)在溶液I中冲CO₂保护气；

3)在冲CO₂保护气后加入人血白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、硒、Fetuin-A、血小板源生长因子PDGF，混合后得溶液Ⅱ；

4)将步骤3)配置好的溶液Ⅱ用0.22μm的滤膜过滤除菌后在CO₂培养箱中平衡5-10小时；

5)将步骤4)平衡好的溶液Ⅱ在CO₂保护气无菌分装，得一步式胚胎培养液。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤2)中冲的为体积百分数为6-7％的CO₂；步骤5)中CO₂保护气为体积百分数为6-7％的CO₂。

10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤4)中培养箱中平衡的条件为：37℃、6％的CO₂培养箱中平衡5-10小时，调节PH在7.20-7.40。