[发明专利]一种香蕉A、B基因组的分型方法

说明书

本发明公开了一种香蕉A、B基因组的分型方法，该方法包括以下步骤：利用PCR‑RFLP标记区分尖叶蕉、长梗蕉基因组，利用IRAP标记确定长梗蕉基因组的个数，结合流式细胞仪测定的倍性结果，确定香蕉种质资源基因型。使用本发明提供的方法不受田间栽培条件和环境影响，取材方便，在香蕉生长任何时期都能进行倍型和基因型准确而快速鉴定。

技术领域

本发明属于香蕉种质资源基因组类型鉴定技术领域，具体涉及一种香蕉A、B基因组的分型方法。

背景技术

香蕉(Musa spp.L.)主要生长在热带和南亚热带地区，是多年生的大型草本果树，也是重要的世界性水果之一。香蕉种植已发展为华南诸省农业结构调整中实现农民增收的主要高效益经济作物。然而，香蕉栽培面临着生物(真菌、细菌和病毒侵染，线虫和昆虫危害)和非生物(干旱、冷害、台风、盐害、重金属污染和营养缺乏等)逆境胁迫，多种检疫性的病虫危害制约香蕉的发展和生存，如枯萎病、叶斑病、线条病毒病、根结线虫和香蕉象甲等。其中，香蕉枯萎病被认为是当前最具毁灭性的病害。培育抗病虫、适应性广、高产优质的香蕉品种，是从根本上解决此类问题的唯一途径。然而，现代栽培香蕉由两个野生二倍体尖叶蕉(MusaacuminataColla，A基因组)和长梗蕉(MusabalbisianaColla，B基因组)经过种内和种间杂交及多倍化进化而来。由于香蕉栽培种大多是三倍体，没有或很少种子，雌雄育性很低，利用传统育种方法培育香蕉品种比较困难，且育种周期很长。因此，缩短育种周期，通过分子标记辅助育种和生物技术应用在今后的香蕉遗传育种中具有重要的作用。然而现今香蕉育种中还存在诸多障碍和技术困难。由于栽培香蕉种质资源中存在A、B基因组构成的多种基因型，以及存在多种倍型(如二倍体、三倍体和四倍体)。

现今世界范围内栽培香蕉主要有AA、AAA、ABB、AAB和BB、BBB等基因型。目前，国内对于香蕉的基因组倍型鉴定主要还是通过外部形态特征来判断，从假茎色泽、叶柄槽、花序梗到苞片的形状、色泽以及果实发育过程中胚珠数量等十五个尖苞叶蕉(代表A基因型)和长梗蕉(代表B基因型)的对比性状来获得相应的分数，来判断属于哪种基因型(Stover andSimmonds，1987；黄秉智等编著，香蕉种质资源描述规范和数据标准，2006)。这种判断标准使用方便，在世界范围内广为接受和应用。然而，由于香蕉品种的外部性状容易受栽培条件和环境因子的影响，倍型和基因型的判断会有较大偏差，不利于种质资源鉴定和遗传育种进程，缺乏较精确的理论依据。而且，外部形态特征需要通过观察整个生长周期的生物学特性来描述和判断，往往需要2-3年才能得到初步的判断，需时较长。而一些杂交育种苗期筛选和田间和组培突变体的倍型和基因型鉴定时，需要快速而准确的判断，通过此方法较难在短时期内达到理想的效果，阻碍了育种进程和品种审定时所需要的精确的生物学特性描述。另外，除A和B染色体基因组外，少数栽培香蕉品种中还存在S(M.schizocarpa)和T(M.textiles)基因组，也很难通过外部形态特征来判断品种的基因型构成。因此，需要建立一种不受田间栽培条件和环境影响，取材方便，在香蕉生长任何时期都能进行倍型和基因型准确而快速鉴定。

发明内容

本发明的目的在于提供一种香蕉A、B基因组的分型方法，可以准确的对香蕉种质资源基因型进行鉴定。

本发明的技术方案为如下：

一种香蕉A、B基因组的分型方法，包括以下步骤：

(1)DNA提取：提取待检测样品的总DNA；