[发明专利]基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的引物、探针、试剂盒及应用在审
| 申请号： | 201910399130.X | 申请日： | 2019-05-14 |
| 公开（公告）号： | CN110042175A | 公开（公告）日： | 2019-07-23 |
| 发明（设计）人： | 崔晓艳;秦嘉超;陈华涛;袁星星;张红梅;刘晓庆;陈景斌;薛晨晨;吴然然;闫强;陈新 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王艳丽 |
| 地址： | 210014 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 菜豆普通花叶病毒 探针 试剂盒 引物 碱基序列 流层 技术检测 试纸条 应用 醋酸镁溶液 缓冲溶液 上游引物 特异性强 下游引物 对照品 缓冲液 聚合酶 重组酶 检测 扩增 制备 判定 诊断 | ||
1.一种基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的引物和探针组合，其特征在于，包括：
上游引物：5′-TTAGATCATCTGTTGGATTACAAGCCAGAACA-3′；
下游引物：[5’BIOTIN]CACCACACCATAAAGCCATTCATCACAATTGA-3′；
探针：[5’FAM]ACAAAGATGCAGTTTGAAATGTGGTACAAT[THF]CTGTGAAGGAAGAGTA[3’BLOCK]。
2.一种基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的引物和探针组合。
3.根据权利要求1所述的基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的试剂盒，其特征在于，还包括测流层析试纸条、测流层析试纸条缓冲溶液、RPA酶、缓冲液、醋酸镁溶液、ddH2O、对照品中的一种或几种。
4.根据权利要求1所述的基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的引物和探针组合在检测菜豆普通花叶病毒中的应用。
5.根据权利要求2或3所述的基于RPA技术检测菜豆普通花叶病毒的试剂盒在检测菜豆普通花叶病毒中的应用。
6.一种检测菜豆普通花叶病毒的方法，其特征在于，包括：以待测样品的cDNA作为模板，利用权利要求1所述的引物和探针组合进行RPA扩增，鉴定扩增产物。
7.根据权利要求6所述的检测菜豆普通花叶病毒的方法，其特征在于，采用侧流层析试纸条上对扩增产物进行鉴定。
8.根据权利要求6所述的检测菜豆普通花叶病毒的方法，其特征在于，RPA扩增的总反应体系为50μL，浓度10μM的上游引物2.1μL，浓度10μM的下游引物2.1μL，浓度10μM的探针0.6μL，Buffer 29.5μL，ddH2O 12.2μL、1μL待测样本的cDNA模板、2.5μL浓度为280mM的MgAc、RPA酶源自TwistDX公司的TwistAmpTMnfo kit。
9.根据权利要求6所述的检测菜豆普通花叶病毒的方法，其特征在于，扩增条件为：39℃，20分钟。
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