[发明专利]γ～聚谷氨酸产生菌及选育、制备γ～聚谷氨酸的方法

权利要求书

1.一种γ～聚谷氨酸产生菌制备γ～聚谷氨酸的方法，包括如下步骤：

a)活化发酵：

γ～聚谷氨酸产生菌菌株活化后，在37±1℃下好氧发酵60～80h；其中，好氧发酵培养基为完全培养基:碳源50～100g/L，氮源5～20g/L，无机盐0～5g/L，谷氨酸或谷氨酸钠15～35g/L，其余为水，pH 7.0±1；该菌株为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL1，已在2019年4月1日保藏于北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其登记入册的编号是CGMCC NO.17508；

碳源为甘油或柠檬酸或葡萄糖的任意一种或几种的组合，氮源为氯化铵、硫酸铵、蛋白胨或酵母粉的任意一种或几种的组合，无机盐为钾盐、钙盐、镁盐、铁盐、锰盐、磷酸盐和盐酸盐的任意一种或几种的组合；

b)消毒：将发酵好的发酵液泵入到暂存罐中，与已经准备好的无菌水进行混合，同时对后续各设备及连接管道进行高温蒸汽消毒，消毒时间15～45分钟；

c)微滤除菌：进行三级微滤除菌，第一级微滤除菌膜孔径为0.45～0.88μm，第二级微滤除菌膜孔径为0.22～0.45μm，第三级微滤除菌膜孔径为0.18～0.22μm，经过三级微滤，得到澄清透明的溶液；

d)超滤浓缩：对上述微滤除菌的溶液进行两级超滤浓缩，第一级超滤浓缩膜孔径为7～15KD，浓缩分子量大的γ～聚谷氨酸，第二级超滤浓缩膜孔径为2～7KD，浓缩分子量小的γ～聚谷氨酸，两次超滤浓缩后得浓缩液，可使得γ～聚谷氨酸的回收率达99％；

e)沉淀干燥；对上述经过两次超滤浓缩得到的γ～聚谷氨酸浓缩液进行有机溶剂沉淀，将得到的沉淀物进行干燥后进行粉碎包装，得到γ～聚谷氨酸纯品。

2.根据权利要求1所述的一种γ～聚谷氨酸产生菌制备γ～聚谷氨酸的方法，其特征在于，步骤a)的生产方式为:γ～聚谷氨酸产生菌菌株活化后，在37℃下好氧发酵60～80h，装液量为37L发酵液/50L发酵罐，转速350rpm；好氧发酵培养基为：甘油80g/L，K₂HPO₄•3H₂O0.80g/L，MgSO₄•7H2O 0.5g/L，FeCl₃•6H₂O 50mg/L，MnSO₄•H₂O 0.13g/L，氯化铵7g/L，谷氨酸20g/L，其余为水，pH 7.0。

3.根据权利要求1所述的一种γ～聚谷氨酸产生菌制备γ～聚谷氨酸的方法，其特征在于，步骤e)中的有机溶剂为甲醇，乙醇，异丙醇，丙酮的一种或几种，浓缩液与有机溶剂的混合比例为1:1.5～4。

4.根据权利要求1所述的一种γ～聚谷氨酸产生菌制备γ～聚谷氨酸的方法，其特征在于，所述好氧发酵培养基为：甘油40g/L，葡萄糖40g/L，柠檬酸20g/L，蛋白胨10g/L，谷氨酸钠30g/L，其余为水，pH 7.0。