[发明专利]γ～聚谷氨酸产生菌及选育、制备γ～聚谷氨酸的方法

说明书

本发明属于生物工程发酵技术领域，具体涉及γ～聚谷氨酸产生菌及选育、制备γ～聚谷氨酸的方法。本发明的地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏单位地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101，登记入册的编号是CGMCC NO.17508，保藏日期是2019年4月1日。以此菌作为生产菌株。本发明的γ～聚谷氨酸的制备方法，包括菌种的筛选，发酵步骤，消毒步骤，微滤除菌，超滤浓缩，沉淀干燥。经过该方法制备的γ～聚谷氨酸纯度高，无杂质，更适宜用于化妆品和医药。

技术领域：

本发明属于生物工程发酵技术领域，具体涉及一种γ～聚谷氨酸产生菌及选育、制备γ～聚谷氨酸的方法。

背景技术：

γ～聚谷氨酸(γ～PGA)是一种不同寻常的阴离子聚酰胺化合物，由d～和1～谷氨酸单位组成，通过氨基和羧酸基之间的酰胺键相连接。根据目前的谷氨酸残留，γ～PGA可分为γ～1～PGA(只有1～谷氨酸残基)、γ～d～PGA(只有d～谷氨酸残基)和γ～ld～PGA(1～和d～谷氨酸残基)。目前，有三种生产γ～PGA的方法：化学合成法、提取法和微生物发酵。与其他方法相比，微生物发酵是最具成本效益的，有许多优点，包括廉价的原材料、最小的环境污染、高天然产品纯度和温和的反应条件。

近年来，日本、韩国主要以发酵法制备γ～PGA，其中日本味之素株式会社和明治制果株式会社均已实现商业化生产γ～PGA。国内对γ～PGA的研究还主要停留在实验室研究阶段，实现工业化生产的并不多。

发明内容：

本发明的一个目的在于提供一种γ～聚谷氨酸产生菌，解决现有γ～聚谷氨酸产生菌产品大多是土壤级的粗品的缺陷，并提供一个γ～聚谷氨酸产生菌培养选育方法。

本发明的另外目的是提供一种γ～聚谷氨酸产生菌制备γ～聚谷氨酸的方法，解决γ～聚谷氨酸的生产工艺的不足及国内γ～聚谷氨酸生产能力不强的问题。经过该方法制备的γ～聚谷氨酸纯度高，无杂质，更适宜用于化妆品和医药。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

一种γ～聚谷氨酸产生菌，其分类命名为地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL1，已经保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码100101，登记入册的编号是CGMCC NO.17508，保藏日期是2019年4月1日。

基于一种γ～聚谷氨酸产生菌的应用，所述γ～聚谷氨酸产生菌用于生产γ～聚谷氨酸。

本发明的一种γ～聚谷氨酸产生菌菌株的选育方法，包括如下步骤：

(1)菌体培养：取地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)BL(从土壤中筛选得到)接种于盛有种子培养基的三角瓶中，于37±1℃振荡培养16～32h，制得种子液。

种子摇瓶培养基配方：甘油10～20g/L，柠檬酸0.8～3g/L，柠檬酸铁铵0.1～1g/L，L～谷氨酸钠2～7g/L，磷酸二氢钾0.3～0.8g/L，硫酸镁0.3～0.8g/L，余量为水，PH 7.0±1。

(2)制备菌悬液；取上述制得的种子液，放于无菌离心管中，以2000～5000r/min离心5～30min，弃去上清液，加入无菌水振荡洗涤，离心5～30min，弃去上清液，再加入无菌水，振荡均匀。

(3)诱变：将上述制得的菌悬液盛于无菌培养皿中，在紫外诱变超净台紫外灯下，距离15～25cm，照射0.5～1.5min；将紫外诱变结束的菌悬液于冰箱中静置1～3小时后，加入硫酸二乙酯，使硫酸二乙酯的终浓度为1～4％，处理时间为10～30min，处理结束后，加入等体积20～50％硫代硫酸钠溶液终止反应。