[发明专利]一种新型肿瘤疫苗的制备方法在审
| 申请号： | 201910403408.6 | 申请日： | 2019-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN110124021A | 公开（公告）日： | 2019-08-16 |
| 发明（设计）人： | 金红林;黄浩;聂晓芬;周洁;洪磊;潘雄华 | 申请（专利权）人： | 迪亚思生命科技（武汉）有限公司 |
| 主分类号： | A61K39/00 | 分类号： | A61K39/00;A61K39/39;A61P35/00 |
| 代理公司： | 湖北天领艾匹律师事务所 42252 | 代理人： | 程明 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖新技术开发区光谷大道77号金融后台服*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 原代肿瘤细胞 次氯酸 细胞裂解液 新型肿瘤 混合液 制备 培养液 疫苗 肿瘤细胞裂解液 浓缩 肿瘤抗原疫苗 肿瘤细胞碎片 免疫激活剂 放疗 免疫原性 肿瘤组织 混合物 抗肿瘤 裂解液 浓缩液 凋亡 可用 灭活 激活 细胞 新鲜 | ||
1.一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，由次氯酸(HCl)处理后的肿瘤细胞裂解液和免疫激活剂混合而成。
2.根据权利要求1所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，所述免疫激活剂具体为CpG。
3.根据权利要求2所述的新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，所述的次氯酸(HClO)处理后的肿瘤细胞裂解液的制备方法，具体步骤如下：
1)：获得新鲜肿瘤组织后进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；
2)：用次氯酸(HClO)处理原代肿瘤细胞，收集次氯酸(HClO)处理细胞后得到的上清液，获得所需裂解液和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；
3)：将所述步骤2)得到的裂解液进行离心，并反复浓缩和纯化，即得到含有肿瘤细胞裂解液的浓缩液；
4)：将所述步骤3)中得到的纯化浓缩后的肿瘤细胞裂解液进行放疗灭活，即得到所述的肿瘤细胞裂解液。
4.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，在步骤1)中的肿瘤组织为自体离体肿瘤组织。
5.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，在步骤2)中的次氯酸(HClO)处理前，需要用HBSS平衡盐溶液清洗肿瘤细胞2-3遍，次氯酸(HClO)处理时的浓度为60-80μM，所述上清液收集时间为次氯酸(HClO)处理后2小时。
6.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，在步骤3)中对裂解液进行离心时，所使用的离心机转速为1000r，且离心时间为5min，离心后弃掉离心管底部的细胞碎片。
7.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，在步骤4)中对裂解液进行纯化浓缩时，将离心后的上清液转移至超滤管内管，采用定角转子离心机，转速为6000*g，离心时间为20min，离心后用200μl枪头轻轻吹打浓缩液，向浓缩管内管加入3-5ml超纯水，再次离心6000*g，且时间为20min，最终得到的浓缩液体积约为300ul，即为含有肿瘤细胞裂解液的浓缩液。
8.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，还需采用放疗技术对纯化浓缩后的肿瘤细胞裂解液进行放疗灭活，且放疗剂量为20Gy，放疗灭活后即得到所述的肿瘤细胞裂解液。
9.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，将肿瘤细胞裂解液和CpG水溶液混合，CpG水溶液的终浓度为1-2mg/ml，CpG水溶液的溶剂为去离子水。
10.根据权利要求3所述的一种新型肿瘤疫苗的制备方法，其特征在于，所述的肿瘤细胞裂解液的浓度约为20-80μg/ml。
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