[发明专利]一种新型肿瘤疫苗的制备方法

说明书

本发明涉及抗肿瘤技术领域，尤其是一种新型肿瘤疫苗的制备方法，由次氯酸处理后的肿瘤细胞裂解液和免疫激活剂混合而成。该方法步骤为：1)获得新鲜肿瘤组织后进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；2)将所述步骤1)得到的原代肿瘤细胞及培养液进行次氯酸处理，收集次氯酸处理细胞后得到的混合液，获得所需裂解液和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；3)将所述步骤2)得到的混合液进行离心，并反复浓缩和纯化，即得到含有细胞裂解液的浓缩液；4)将所述步骤3)中得到的纯化浓缩后的细胞裂解液进行放疗灭活。本发明可用于解决普通肿瘤抗原疫苗免疫原性低，不精确，免疫反应激活效率低下的问题。

技术领域

本发明涉及抗肿瘤技术领域，尤其涉及一种新型肿瘤疫苗的制备方法。

背景技术

随着肿瘤基因组学和免疫学的快速发展，免疫疗法已成为继放射治疗、化疗、手术治疗后的第四种治疗手段。放化疗的靶向性差，容易损伤正常细胞，产生不良反应。而免疫治疗能够特异性的识别肿瘤细胞表面的抗原，靶向杀伤肿瘤细胞的同时减少副反应的发生。在免疫治疗中，肿瘤疫苗是近年来研究的热点之一。肿瘤疫苗通过表达特异性的、具有免疫原性的肿瘤抗原，如肿瘤细胞裂解液、肿瘤相关蛋白或抗原多肽以及表达肿瘤抗原的相关基因等，在细胞因子、趋化因子等佐剂的辅助下激活机体免疫系统产生特异性抗肿瘤细胞免疫效应，增强机体的抗癌能力，阻止肿瘤的生长、扩散和复发，以达到清除或控制肿瘤的目的。

目前临床上已经获批的肿瘤疫苗包括树突状疫苗(DC疫苗)、宫颈癌疫苗及个体化sipuleucel-T疫苗，但是这些疫苗激活效率低、抗原少，临床疗效欠佳且价格昂贵，在一定程度上限制了其在临床上的大规模使用。次氯酸(HClO)是一种有效的氧化剂，在急性炎症期由中性粒细胞髓过氧化物酶(MPO)催化过氧化氢(H₂O₂)和氯离子(cl)产生。除了强大的杀伤作用外，有研究显示，HClO能够显著增加蛋白抗原的免疫原性。经HClO氧化后的蛋白更容易被抗原提呈细胞(APC)吞噬并提呈给T细胞，促进T细胞的活化和增殖，增强机体的免疫杀伤作用。因此，如何有效利用HClO氧化肿瘤细胞后的强大免疫激活效应，增强机体的抗肿瘤能力，仍需要进一步去探索。免疫佐剂主要用来辅助抗原诱导机体产生免疫反应，它可以为T细胞的活化提供第二信号，是疫苗开发的一部分。人工合成的含有非甲基化CpG基序的寡聚核苷酸链(CpG-ODN)是一种水性佐剂，自身无免疫原性，能提高蛋白抗原的免疫原性，直接激活单核细胞、巨噬细胞和树突状细胞并刺激这些细胞分泌IL-12、TNF-α、IFN-γ等细胞因子，诱导Th1型免疫应答。同时它还协同激活T细胞。因此，CpG ODN可作为多种抗原的免疫佐剂而发挥独特的免疫增强作用。因此，开发一种免疫激活能力强、抗原谱广泛、制备工艺简单的疫苗，成为亟待解决的问题。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种新型肿瘤疫苗的制备方法。

为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：

设计一种新型肿瘤疫苗的制备方法，由次氯酸(HClO)处理后的肿瘤细胞裂解液和免疫激活剂混合而成。

优选的，所述免疫激活剂具体为CpG。

优选的，所述的次氯酸(HClO)处理后的肿瘤细胞裂解液的制备方法，具体步骤如下：

1)：获得新鲜肿瘤组织后进行原代肿瘤细胞培养，并获得原代肿瘤细胞；

2)：用次氯酸(HClO)处理原代肿瘤细胞，收集次氯酸(HClO)处理细胞后得到的上清液，获得所需裂解液和凋亡的肿瘤细胞碎片混合物；

3)：将所述步骤2)得到的裂解液进行离心，并反复浓缩和纯化，即得到含有肿瘤细胞裂解液的浓缩液；

4)：将所述步骤3)中得到的纯化浓缩后的肿瘤细胞裂解液进行放疗灭活，即得到所述的肿瘤细胞裂解液。

优选的，在步骤1)中的肿瘤组织为自体离体肿瘤组织。