[发明专利]一种细胞组合物在癌细胞NCI-H1975上的应用

说明书

本发明公开了一种细胞组合物在癌细胞NCI‑H1975上的应用，具体涉及γδT细胞和NK细胞组合物在NCI‑H1975上的应用。通过共培养诱导扩增方法获得γδT和NK细胞组合物，混合γδT和NK细胞毒性/活性强，对NCI‑H1975的作用强，几乎可以100％杀伤NCI‑H1975，为NCI‑H1975型癌症及疾病提供治疗方案；简化了在临床中治疗过程，简化了治疗手段，也降低了治疗成本。

技术领域：

本发明涉及生物技术领域，具体涉及免疫细胞在疾病上的应用，更具体涉及细胞组合物在癌细胞NCI-H1975上的应用。

背景技术：

γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞。

γδT细胞是执行固有免疫功能的T细胞，其TCR由γ和δ链组成。此类T细胞主要分布于肠道呼吸道以及泌尿生殖道等黏膜和皮下组织，在外周血中只占CD3+T细胞的0.5％-1％。其TCR缺乏多样性，可直接识别某些完整的多肽抗原。γδT细胞所识别的抗原种类有限:①HSP；②感染细胞表面CD1分子提成的脂类抗原；③某些病毒蛋白或表达于感染细胞表面的病毒蛋白；④细菌裂解产物中的磷酸化抗原。

γδT细胞是一种既能杀伤癌细胞，肿瘤干细胞，又能识别癌抗原的免疫细胞，它的杀伤性较强，但肿瘤干细胞杀伤不如NK细胞。因此，它主要用于杀伤癌细胞与协助DC细胞识别发现癌细胞抗原，然后将这些抗原进行杀伤或是传递给其他细胞。同时，γδT细胞主要分布于皮肤和黏膜组织上，因此对于黏膜方面的癌症治疗效果突出，比如消化道、呼吸道、生殖系统方面的癌症效果显著。

γδT细胞主要在胸腺中发育成熟，通过V(D)J基因重组产生γδT细胞受体(TCR)。通过特异性的基因重排，从一个共同淋巴细胞前体(common lymphoidprecursor,CLP)分化为表达αβ受体和γδ受体的T细胞系。γδT细胞不易受抗原加工和呈递缺失的影响，因此γδT细胞具有很高的临床肿瘤免疫治疗潜在应用价值。γδT细胞在肿瘤免疫监视和抗肿瘤免疫反应中发挥重要作用。

γδT细胞作用还体现在：

①γδT细胞能够与多种免疫细胞发生作用，参加抗肿瘤免疫应答。

②γδT细胞能够在肿瘤发生的早期阶段迅速引起有效的抗肿瘤免疫应答。

③γδT细胞在抗肿瘤免疫过程中具有重要的保护作用。

④γδT能够利用细胞毒效应杀伤肿瘤细胞，防止肿瘤的发生发展。

⑤γδT细胞能够分泌相关因子，这些因子能够放大肿瘤信号。

⑥γδT细胞能分泌穿孔素，诱导肿瘤细胞凋亡。

由于γδT细胞在外周血中的含量极低，大大限制了γδT细胞作为过继免疫细胞在临床上的应用。目前从外周血单个核细胞扩增γδT细胞，扩增倍数低，细胞纯度及细胞量不高。扩增出的γδT细胞很难满足临床需求，即使通过优化各种诱导条件及扩增方法扩增出的单一γδT细胞在相应的免疫性疾病和肿瘤疾病上有所应用，但是应用后并未达到人们理想中的效果。

细胞免疫治疗是目前最具有前景的肿瘤治疗方式之一，通过体外扩增或改造后回输到病人体内达到杀伤肿瘤细胞的目的或者通过活化机体免疫系统，增强肿瘤患者自身免疫功能从而抵抗肿瘤或其他疾病。目前，NK细胞免疫治疗受到越来越多的重视。NK细胞占人外周血淋巴细胞的5-15％，一般定义其表型为CD3-CD56+，NK细胞又可以进一步细分为两个主要的亚群：具有免疫调节功能的CD56highCD16-细胞和具有细胞毒活性的CD56dimCD16+细胞。NK细胞在抗病毒感染和抗肿瘤的早期免疫反应中发挥着重要的免疫监视功能，NK细胞不需要识别肿瘤特异性抗原，便可直接、快速的发挥细胞毒活性。特别重要的是NK细胞能够有效地清除机体内的肿瘤干细胞样细胞，抑制肿瘤的生长和转移。