[发明专利]从含有游离核酸的样品中分离游离核酸的方法和系统

权利要求书

1.一种从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的方法，其包括：

1)在所述测试样品中加入蛋白酶K和裂解-结合溶液得到待结合样品；

2)将所述待结合样品离心后加入醇类物质；

3)将上一步加入了醇类的待结合样品与固相载体接触，使所述待结合样品中的游离核酸结合到所述固相载体；

4)用一种或多种洗涤溶液洗涤所述固相载体，用于去除目标产物游离核酸以外的物质；

5)向所述固相载体加入洗脱液，用于洗脱结合于所述固相载体的游离核酸，得到目标产物游离核酸；

其特征在于，所述裂解-结合溶液的pH为酸性，且上述所有步骤在常温条件下进行。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述裂解-结合溶液与所述测试样品的体积比为0.5～2；

优选的，所述裂解-结合溶液与所述测试样品体积比为1：1；

所述裂解-结合溶液中包括离液盐和/或尿素；

优选的，所述离液盐为胍盐；

更优选的，所述胍盐为硫氰酸胍、异硫氰酸胍或盐酸胍；

和/或，所述裂解-结合溶液还包括Tris盐酸和/或TritonX-100；

和/或，所述裂解-结合溶液的pH值在3.0～5.5之间；

和/或，所述醇类物质为乙醇或异丙醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤3)中所述待结合样品和所述固相载体的结合是在负压条件下进行；优选的，所述负压在-300mbar到-800mbar之间；

和/或，所述步骤3)还包括对所述待结合样品中的非目标组分进行加压过滤；

优选的，所述加压过滤是手动加压过滤。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

步骤4)中所述的洗涤溶液为多种，每种洗涤溶液的洗涤次数为一次或多次；

优选的，所述的洗涤溶液为洗涤溶液1和洗涤溶液2两种；

更优选的，所述洗涤溶液1也含有胍盐和/或Tris盐酸；

更优选的，所述洗涤溶液1为弱酸性，洗涤溶液2为弱碱性；

更优选的，所述洗涤溶液1和2中还包括无水乙醇；

和/或，洗涤所述固相载体的方法是真空抽滤和/或离心过滤。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述步骤1)还包括在所述测试样品中加入载体RNA；

和/或，在步骤1)和2)之间还包括孵育步骤；

优选的，孵育温度为50℃～70℃；

更优选的，所述孵育步骤还包括孵育后的短暂离心。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述蛋白酶K的终浓度在15mg/mL～40mg/mL之间；

和/或，所述洗脱溶液包含Tris盐酸且其pH值在7.0～9.0之间；

和/或，所述洗脱溶液与初始测试样品的体积比为1：125～1：50；

和/或，还包括对所述步骤5)得到的目标产物游离核酸进行定量；

优选的，所述定量方法为PCR法。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，

所述游离核酸是游离DNA或游离RNA，所述测试样品是血浆样品、组织样品、尿液、体液或唾液样品；

和/或，所述固相载体是核酸吸附纯化柱；

优选的，所述核酸吸附纯化柱是硅胶膜核酸吸附纯化柱。

8.一种从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的系统，其特征在于，

包括适用于如权利要求1～7中任一权利要求所述的从含有游离核酸的测试样品中分离游离核酸的方法的裂解-结合溶液、洗涤溶液和洗脱溶液。

9.如权利要求8所述的系统，其特征在于，

还包括用于容纳所述测试样品和试剂的储液管，内设核酸纯化柱并可与所述储液管相连的核酸纯化柱管，以及用于连接所述核酸纯化柱管与真空抽滤组件的真空适配管。

10.如权利要求9所述的系统，其特征在于，

还包括以下组分的一种或多种：蛋白酶K，载体RNA；

和/或，以下组件的一种或多种：废液收集管，加压装置；

优选的，所述加压装置为与储液管内径匹配的加压柱塞；

和/或，所述储液管末端和/或真空适配管顶端设有O型密封圈，分别用于匹配所述核酸纯化柱管的顶端和末端。